人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA試劑盒

尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。 6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

簡介

本試劑僅供研究使用。目的:本試劑盒用於測定人血清,血漿及相關液體樣本中原鈣黏素1(PCDH1)的含量。

實驗原理:

本試劑盒套用雙抗體夾心法測定標本中人原鈣黏素1(PCDH1)水平。用純化的人原鈣黏素1(PCDH1)抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入原鈣黏素1(PCDH1),再與HRP標記的原鈣黏素1(PCDH1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的原鈣黏素1(PCDH1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人原鈣黏素1(PCDH1)含量。

試劑盒組成:

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1個 1個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品:270ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉澱,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘後,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反覆凍融,以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本後,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測,其餘冷凍備用。
6. 標本採集後儘早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃保存,但應避免反覆凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然後在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然後從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋後各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30ng/L,15ng/L)。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,儘量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩乾,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍乾。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震盪混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液後15分鐘以內進行。

注意事項:

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關係數R值為0.990以上。
2.批內與批見應分別小於9%和11%

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

熱門詞條

聯絡我們