酶免疫電泳

酶免疫電泳是指通過酶作用底物而顯色，指示沉澱線的存在。該法的敏感性大大高於對流免疫電泳。以檢測血吸蟲抗體為主要實驗。

原理

利用酶標記抗原（抗體）和待測抗體（抗原）在電場中向一定方向移動，在比例適當的地方形成沉澱線，通過酶作用底物而顯色，指示沉澱線的存在。該法的敏感性大大高於對流免疫電泳。
本試驗以檢測血吸蟲抗體為例。

材料試劑

1．0.02Mol/pH8.6巴比妥緩衝液

巴比妥0.553g

巴比妥鈉3.503g

乳酸鈣0.512g

H2O加至1000ml

2．0.1Mol/LpH7.0PBS（0.14Mol/LNacl）

3．0.2Mol/LpH7.6硼酸緩衝液

硼酸10.510g

硼砂2.860g

H2O加至1000ml

操作方法

酶免疫電泳

1．酶標抗原的製備用1ml血吸蟲卵抗原（蛋白含量為1.5mg/ml~2.0mg/ml）加入3mg~4mg辣根過氧化物酶（蛋白質：酶=1︰2），液體呈棕紅色，然後在輕輕攪拌下，緩慢加入50μl1％戊二醛，要求在5min~10min內滴加完畢。置20℃~25℃攪拌2h。裝入透析袋，於1000ml、0.1Mol/LpH7.0PBS液4℃透析2天，並換液3次~4次。取出酶標記物加等量純甘油，使含50％甘油試劑，即為酶標抗原。分裝小瓶，存於-20℃中備用。

2．瓊脂凝膠板的製備取優質瓊脂，以0.02Mol/LpH8.6巴比妥緩衝液製成1％瓊脂，溶化後，置於玻片上，製成2mm厚的凝膠板。

3．打孔加樣打6對孔，抗原孔徑為0.30cm，抗體孔為長方形0.2cmױ.1cm。抗原、抗體各加5μl及50μl。抗原用上述酶標抗原做1︰20至1︰30稀釋。

4．電泳抗原孔置於負極，電壓4V/cm~5V/cm，電泳時間45min~60min，電泳後，於蒸餾水中盪洗1min~2min即可，用濾紙吸去水分，並用毛細吸管吸盡長孔及圓孔中的水液後，即可用底物的溶液顯色。

5．配製底物溶液，現用現配。將飽和聯苯胺溶液，加等量pH7.6硼酸緩衝液，然後將上液9份和0.1％過氧化氫1份相混，即為所需的底物溶液。

6．免疫酶染色將瓊脂凝膠板置於培養皿中，緩緩傾入底物溶液，直至浸沒凝膠板為止，置於室溫或37℃，經1h~2h用目測可觀察反應結果。

結果判定

1．陽性反應：在抗原抗體孔之間呈現明顯的棕紅色的線條。

2．陰性反應：不出現棕紅色線條者。

相關詞條

抗原、沉澱線、血吸蟲抗體、巴比妥、巴比妥鈉