足印圖譜法

tin 為利用DNA與蛋白質結合,在結合的區域不易再受DNA分解酶或化學修飾下而分析與蛋白質相互作用的DNA部位的方法。 在與蛋白質結合之後,用DNA分解酶(核酸內切酶)在溫和條件下使之發生作用,或在一定條件下用化學方法分解DNA。

簡介

足印圖譜法 foot printing method 為利用DNA與蛋白質結合,在結合的區域不易再受DNA分解酶或化學修飾下而分析與蛋白質相互作用的DNA部位的方法。是與指紋圖譜法對比而提出的術語,意思是分析DNA上印有的蛋白質印跡。

具體作法

用32P標記含有作為目標領域的DNA片段的一個末端。在與蛋白質結合之後,用DNA分解酶(核酸內切酶)在溫和條件下使之發生作用,或在一定條件下用化學方法分解DNA。分解產物可用聚丙烯醯胺凝膠電泳法按鏈長將之分開,用放射自顯影法而測定DNA的片段。在不存在蛋白質的情況下,DNA從標記的末端開始,在不規則的部位被分解,可得到連續的梯狀花紋。與此相反,與蛋白質結合時,因該部分的DNA不分解,花紋就變得不連續的狀態,結合蛋白的部分可在梯狀花紋的空白部分找出。套用此法可分析阻遏物和RNA聚合酶的結合部位。

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