用品及準備
待檢血小板懸液,已知血小板抗體血清,離心機,U型96孔反應板,福馬林,聚山梨酯 20,胎牛血清,兔抗人IgG,IgG抗D致敏紅細胞。方法及內容
1.將ACD-A與新鮮待檢血液按1:7混勻,以800r/min離心10-15min,獲得富含血小板血漿後加入該血漿量的1/10 ACD混勻,再以3000r/min離心15min,取壓積血小板用生理鹽水洗滌2次,最後配成100×109/L血小板懸液。
2.取U型反應板每孔加入25μl血小板懸液,水平振盪15s以1500r/min離心反應板5min,然後加入50μl 8%-12%的福馬林 (pH7.2磷酸鹽緩衝液稀釋甲醛),室溫溫育固定20min,然後取出反應板,用生理鹽水洗滌5—6次。
3.每個反應孔加入已知血小板抗體的血清25μl,置於室溫混勻溫育1h,用0.05%聚山梨酯20PBS洗滌反應板6次,每個孔內加入兔抗人IgG25μl,溫育30min,加入1%抗D致敏紅細胞25μl,反應板置於濕盒內靜置2h後或次日觀察結果。 注意事項 離心時溫度不能太高,以免破壞血小板抗原性;操作台上應加濕布,以防靜電干擾;反應板溫育過程中,應置於濕度適合的環境中,以防孔內乾涸影響結果判讀。
參考資料:
1.《醫療護理技術操作常規》,http://www.yongyao.net/yhcghtml/da5928f1-83b3-4f97-af2c-3a8dfe8cc2d5.htm