一、檢測原理
本試劑盒是利用競爭ELISA方法,在酶標板微孔上預包被抗萊克多巴胺抗原。檢測時,加入標準品或樣品溶液,萊克多巴胺抗體及酶標記物,包被抗原和加入樣本中的萊克多巴胺競爭性地與萊克多巴胺抗體結合後,再與酶標記物形成抗原抗體複合物,用TMB底物顯色;加入反應終止液,在450nm波長酶標儀下進行檢測,樣品中的萊克多巴胺濃度與吸收光強度成反比。
二、檢測範圍
本試劑盒是套用ELISA技術研發的藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術比較,能經濟、快速地檢測出尿液、畜禽組織、肝臟等中的萊克多巴胺。
三、交叉反應率
與類似物的交叉反應率:
萊克多巴胺………………………………………………100%
多巴酚丁胺…………………………………………15%
鹽酸多巴胺…………………………………………1%
克侖特羅…………………………………………1%
沙丁胺醇…………………………………………1%
四、試劑盒組成
酶標板1塊,96孔/板
濃縮標準液6瓶(1ml/瓶):
0 ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
抗體工作液 ………………………7ml
酶標記物 …………………………7ml
底物液A …………………………7ml
底物液B …………………………7ml
終止液 …………………………7ml
20X濃縮洗滌液 ………………40 ml
5X濃縮復溶液 ………………50 ml
說明書 ……………………………1份
五、 需要但試劑盒中不提供的器材和試劑
(1)設備
……微孔板酶標儀(450nm)
……振盪器、離心機
……微量移液器:20μl~200μl,100μl~1000μl
……容量瓶:100ml,500ml,1000ml
(2)試劑
……乙酸乙酯、正己烷、乙腈、濃HCL、Na2CO3(無水)、NaHCO3
六、溶液的配製
樣本前處理需配製:
配液1:pH 10.6 0.1M CB緩衝液配製
2.56g Na2CO3(無水) 2.1g NaHCO3 加水定容至500ml
配液2:0.1M HCL
0.86mL濃HCL加去離子水定容至100mL
配液3:乙腈-0.1M HCL溶液(飼料提取用)
84ml乙腈與16ml 0.1M HCL混勻
配液4:復溶液1X
5X復溶液在使用前請按1:4稀釋(1份濃縮復溶液+4份去離子水)
配液5:洗滌液
將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用蒸餾水稀釋
20×濃縮洗滌液在使用前請按1:19稀釋(1份濃縮復溶液+19份去離子水)(可按需配置)
七、樣本前處理方法
樣本處理前須知
處理任何樣本時,都須注意:
(1)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
(2)實驗之前須檢查各種實驗器具是否乾淨,必須使用潔淨實驗器具,以避免污染干擾實驗結果。
樣本處理步驟:
(A)尿樣本
1、 取1ml清亮尿樣,與1ml pH 10.6 0.1M CB緩衝液充分混合,加入4ml乙酸乙酯,充分振盪。4000r/min以上,15℃離心5min;
2、 取上層有機相2ml在50℃下氮氣吹乾;
1、 取1ml稀釋後的復溶液溶解殘留物,混合30s;
2、 取50µl用於分析。
尿樣本稀釋倍數:2
(B)畜禽組織(雞、鴨、豬肌肉/肝臟、雞蛋、魚、蝦等)
1、 稱取組織3±0.05g ,先加入無水乙腈9ml充分振盪5min。4000r/min以上,15℃離心10min;
2、 取上清液4ml氮氣流下吹乾;
3、 加入1ml正己烷振盪溶解;
4、 再加入1ml 已稀釋了的復溶液混合振盪30s,4000r/min以上,15℃離心5min,去上層;
5、 取肉樣本提取液100µl與100µl已稀釋好的復溶液混合,混合30s;
6、 取50µl用於分析。
十、試劑盒靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度:0.1ppb
樣本最低檢測限:
組織(肉樣本)………………………………0.2ppb
組織(肝樣本)………………………………0.4ppb
飼料……………………………………………15ppb
尿樣 …………………………………………… 0.2ppb
回收率:
組織……………………………85±10%
尿樣 …………………………95±15%
飼料 …………………………80±10%
精密度:
試劑盒的變異係數均小於10%
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