酸催化水解
苷鍵苷鍵被稀酸催化水解，反應一般在水中或者烯醇中進行，所用的酸有鹽酸、硫酸、乙酸和甲酸等。苷發生酸催化水解反應的機理是：苷鍵原子首先發生質子化，然後苷鍵斷裂生成苷元和糖的陽碳離子中間體，在水中陽碳離子經溶劑化，再脫去氫離子而形成糖分子。
酸催化水解的難易與苷鍵原子的鹼度，即苷原子上的電子云密度以及其空間環境有密切關係。只要有利於苷元質子化的因素，就能有利於水解的進行。苷類酸水解的難易有以下規律：
a.按苷原子的不同，苷類酸水解的易難順序是：N-苷鍵>O-苷鍵>S-苷鍵>C-苷鍵。
b.呋喃糖苷較吡喃糖苷容易水解
c.酮糖苷較醛糖苷易於水解
d.羥基糖較氨基糖易於水解
鹼催化水解
由於一般苷鍵具有縮醛結構，對稀鹼較穩定，不易被鹼催化水解，故很少用鹼催化水解反應，多數採用酸催化或者酶催化。但酯苷、酚苷、烯醇苷等苷類易為鹼催化水解
酶催化水解
苷類化合物除可以被酸或鹼催化水解外，還易受酶的作用而水解。特別是對難以水解或不穩定的苷，套用酸水解法往往會使苷元脫水、異構化等反應，而得不到真正的苷元，而酶水解條件溫和，不會破壞苷元的結構，可以得到真正的苷元。同時酶的高度專屬性和水解的漸進性，還可以提供更多得結構信息，也為酸或鹼催化反應所不及。因為酶水解已成為苷類水解的重要方法
氧化開裂法
苷類分子中的糖基具有鄰二醇結構，可以被過碘酸氧化開裂。Smith降解法是常用的氧化開裂法。它再苷的結構研究中具有重要作用。對難以水解的碳苷，也可以用此法進行水解，避免使用劇烈的酸進行水解，可獲得連有一個醛基、但其他結構保持不變的苷元。此外，對一些苷元結構不太穩定的苷類，如某些皂苷，為了避免酸水解使苷元發生脫水或結構上的變化以得到真正的苷元，也常用Smith降解法進行水解
