矛頭蝮蛇毒酶
矛頭蝮蛇毒酶(batroxobin)等[1].TLE主要存在於腹亞科蛇蛇毒中.由於蛇毒成分複雜,不同種類的蛇,甚至同一種類的蛇,於不同產地,不同時間採集的蛇毒,其蛋白成分也不同,同一蛋白的含量也有所差異[1],因而TLE的分離純化工藝難以確定.隨著分子生物學的發展,利用基因工程的方法獲得蛇毒TLE不失是一種有效的途徑.本研究從尖吻蝮蛇毒腺總RNA中通過RT2PCR擴增,獲得1個類凝血酶基因,並對其序列進行了分析,報導如下.
材料和方法主要試劑大腸桿菌菌株DH5α由本室保存,Oligod(T)15
基金項目:國家自然科學基金(30400272)和上海市科委基礎研究重
點項目資助(04JC14002)
通訊作者:許金波,研究員.電話(010)66931964.E2mail:xujb@ya2
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本序列已經被GenBank收錄,其登入號為AY861382
2005-02-28收稿;2005-06-03接受
245中國實驗血液學雜誌JournalofExperimentalHematology2005;13(4):542-547
primers,ReverseTranscriptaseM2MLV,TaqDNA聚合
酶(5U/μl),LATaqTMDNA聚合酶(5U/μl),T4
DNA連線酶,pMD182T載體,DL2000DNAMarker
均為TaKaRa公司產品.DEPC,RNasin為Promega
公司產品.TRIZOL為Invitrogen公司產品.DNA回
收試劑盒為鼎國生物技術公司產品.其它試劑為國
產試劑純.
總RNA的提取
尖吻蝮蛇取自廣西.尖吻蝮蛇毒腺總RNA的提取
參照TRIZOL試劑說明書進行.取毒腺組織,剪成小
塊,液氮研磨,按0.50mg/ml加入TRIZOL試劑,經
過氯仿抽提,異丙醇沉澱,75%乙醇洗滌乾燥後溶解
於無RNase的去離子水中.
RT2PCR反應
引物設計根據TLEcDAN序列5'和3'端的保守性
序列設計2條引物,上游引物序列為:5′ATGGT2
GCTGATCAGAGTGCTAGC3′,下游引物序列為:5′
CTCCTCTTAACTTTTTCAAAAGTTT3′,由奧科生物
技術公司合成.
