1994—2010年，分局以維護社會穩定為中心，以增強民眾安全感和滿意度為目標，緊緊圍繞東湖高新區各項建設事業的發展，依法履行工作職責，嚴格落實打擊、防範、教育、管理、建設、改造等社會治安管理各項工作措施，有力維護了東湖高新區社會政治穩定和治安大局平穩。
為加強東湖高新區公安保衛工作，1994年，武漢市公安局文化保衛處向東湖高新區管委會綜治辦派駐一名民警擔任治安特派員，負責協調東湖高新區企業與駐地公安機關的相關事宜。隨著東湖高新區經濟發展和涉及企業的公安保衛任務增多，1998年8月，經武漢市公安局批准，設立全市首家警署——武漢市公安局東湖新技術開發區警署（正科級建制），隸屬武漢市公安局文化保衛處。警署內設刑偵、基礎、內保、巡邏警隊，負責關東、關南兩個工業園區以及開發區託管的原洪山區鋼鐵、群英、關山、曙光等四個行政村的公安管理工作。
2000年3月，13位全國政協委員向全國政協會議提出依託武漢東湖新技術開發區建設“中國光谷”提案（被全國政協九屆三次會議定為1331號提案），為支持東湖高新區實現跨越式發展，並提供與之配套的公安管理服務，同年5月，經武漢市公安局批准，在原警署基礎上成立“武漢市公安局東湖新技術開發區分局”（正處級建制），為武漢市公安局直屬專業分局。分局內設辦公室、政治處（紀委）、一大隊、二大隊、刑偵大隊及防火科，下設關東、關南、曙光、馬鞍山等4個派出所。9月，又增設茅店派出所，負責開發區新託管的原江夏區周店、關山（同年更名為關南村）、茅店、鄭橋、東山等五個行政村和政院居委會的公安管理工作，全局警力89人。
2002年8月，根據市人大代表、政協委員提議案，為解決洪山區等地治安管轄“插花”問題，轄區鋼鐵、群英、關山、曙光等四個行政村治安管轄移交洪山公安分局。同月，撤銷曙光、馬鞍山兩個派出所，將其警力分別合併至關東、關南派出所。2003年3月，鋼鐵村等四村重新劃歸分局管轄。5月，為加強東湖高新區社會面巡邏控制，增設巡邏民警大隊。9月，防火科更名為消防大隊。2005年2月，按照武漢市公安局部署要求，加強公安機關正規化建設，對部分內設機構名稱、職能進行調整。原一大隊變更為人口管理大隊（負責戶政、國內安全、出入境），原二大隊變更為治安管理大隊（負責治安、內保、網監）。12月，增設同心派出所，負責開發區託管原江夏區佛祖嶺等十三個行政村及流芳社區居委會範圍內公安管理工作。
2006年，東湖高新區以整體託管街、鄉、鎮的方式拓展發展空間，其街、鄉、鎮所屬公安派出所成建制劃歸分局管轄。同時，為適應公安工作需要，分局內設機構亦進行了調整。2007年10月，原江夏公安分局豹澥鎮派出所劃入分局，後更名為豹澥派出所。2008年4月，增設法制室（行政複議辦公室），進一步加強內部執法監督檢查。同年10月，原洪山公安分局九峰鄉派出所劃入分局，後更名為九峰派出所。2010年6月，原洪山公安分局花山鎮派出所、左嶺鎮派出所、葛化街派出所以及原江夏公安分局流芳街派出所劃入分局，後依次更名為花山派出所、左嶺派出所、葛化派出所、流芳派出所。至2010年底，分局內設辦公室、政治處（紀委）、法制室等3個綜合部門以及人口、治安、刑偵、巡邏、消防等5個職能大隊，下設關東、關南、茅店、同心、豹澥、九峰、花山、左嶺、葛化、流芳等10個派出所，全局警力323人。
