將樣品置於平緩的預先制好密度梯度介質上,進行離心,較大的顆粒將比較小的顆粒更快地沉降。通過梯度介質,形成幾個明顯的區帶(條帶)。這種方法有時間限制,在任一區帶到達管底之前必須停止離心。差速區帶離心法僅用於分離有一定沉降係數差的顆粒,與密度無關。大小相同、密度不同的顆粒(如溶酶體、線粒體和過氧化物酶體)不能用本法分離。
離心時,由於離心力的作用,顆粒離開原樣品層,按不同沉降速率沿管底沉降。離心一定時間後,沉降的顆粒逐漸分開,最後形成一系列界面清楚的不連續區帶。沉降係數越大,往下沉降的越快,所呈現的區帶也越低。沉降係數較小的顆粒,則在較上部分依次出現。從顆粒的沉降情況看來,離心必須在沉降最快的顆粒(大顆粒)到達管底前或剛到達管底時結束,使顆粒處於不完全的沉降狀態,而出現在某一些特定的區帶內。
在離心過程中,區帶的位置和形狀(或頻寬)隨時間而改變,因此,區帶的寬度不僅取決於樣品組分的數量、梯度的斜率、顆粒的擴散作用和均一性,也與離心時間有關。時間越長,區帶越寬。適當增加離心力可縮短離心時間,並可減少擴散導致的區帶加寬現象,增加區帶界面的穩定性。
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