層析柱
層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般製備用凝膠柱，直徑大於2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布於凝膠柱床面上。此外， 直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決於柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關，但由於軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞，一般不超過1米。分族分離時用短柱，一般凝膠柱長20-30厘米，柱高與直徑的比較5:1─10:1，凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍。 分級分離時柱高與直徑之線為20:1─100:1，常用凝膠柱有50×25厘米，10×25厘米。層析柱濾板下的死體積應儘可能的小，如果支掌濾板下的死體積大，被分離組分之間重新混合的可能性就大，其結果是影響洗脫峰形，出現拖尾出象，降低分辯力。在精確分離時，死體積不能超過總床體積的1/1000。
中壓分離層析柱操作方法
以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例
吸附劑的處理及柱子裝填
將一定量薄層層析矽膠裝人搪瓷盤置於烘箱中，於105C活化2H後，取出放置室溫即可裝柱。柱子採用乾法填充，填滿整個柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計量溶劑泵按丙酮一石油醚(5：95)比例泵人溶劑，至溶劑流出止。
上樣
將冬凌草的乙醇提取物400G用適量丙酮溶解，泵人中壓柱柱頭，然後泵人石油醚1000RID。
洗脫
以一定比例的石油醚一丙酮為洗脫液，60ML/MIN的流速進行梯度洗脫，柱的使用壓力為2～ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC檢識展開劑丙酮一氯仿(2：8)，顯色劑5%香草醛濃硫酸乙醇液
至洗脫完全，相同流份合併，回收溶劑。將冬凌草甲素流份合併蒸乾。加人適量甲醇熱溶後自然放置，析出結晶，為冬凌草甲素。
層析柱再生、平衡
有效成分經TLC檢識全部流出後，用純丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚(5：95)平衡後，可再次上樣，反覆使用(使用次數隨原料不同而異，一般可連續使用2—6個月以上)。
重結晶
冬凌草甲素結晶析出完全後，減壓過濾，然後用少量甲醇洗滌(洗滌液保留，作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶後放置，結晶再次析出，待結晶完全後，抽濾，用少量乙醚洗滌，將結晶室溫下晾乾後置真空乾燥箱中，35度真空乾燥至恆重。密封於瓶中，置乾燥器中保存。
薄層層析分析
取適量冬凌草甲素對照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品甲醇溶解後點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿一丙酮(8：2)為展開劑進行展開，5% 香草醛濃硫酸乙醇液顯色，於105。C烘至斑點清晰。表明在該展開系統下，冬凌草甲素樣品和對照品都具有相同的RF值，並呈現出同樣的藍綠色斑點，在製備的冬凌草甲素樣品中，沒有雜質斑痕。
| 註冊號 | 國食藥監械(進)字2009第1400388號 [1] | 生產廠商名稱（中文） | |
|---|---|---|---|
| 產品性能結構及組成 | 產品主要組成：層析柱由層析柱體、填充劑和密封栓組成。柱體為 不鏽鋼材質 ；填充劑為異丁烯酸酯合成物形成的親水聚合物約0.6mL；密封栓由聚醚醚酮樹脂( PEEK )組成。 | 產品適用範圍 | 該產品用於對血液中不同的 糖化血紅蛋白 進行分離。 |
| 註冊代理 | 希米科醫藥技術發展(北京)有限公司 | 售後服務機構 | 愛科來國際貿易(上海)有限公司 |
| 批准日期 | 2009.02.26 | 有效期截止日 | 2013.02.25 |
| 生產廠商名稱（英文） | ARKRAY Factory, Inc. | 生產廠地址（中文） | 1480 Koji, Konan-cho, Koka, Shiga, JAPAN |
| 生產場所 | 1480 Koji, Konan-cho, Koka, Shiga, JAPAN | 生產國（中文） | 日本 |
| 產品名稱（中文） | 層析柱 [2] | 產品名稱（英文） | COLUMN UNIT |
| 規格型號 | HS-VII | 產品標準 | 進口產品註冊標準YZB/JAP 0057-2009《層析柱》 |
