介紹
固定化酶技術是把從生物體內提取出來的酶,用人工方法同定在載體上。
1916年N elson和GrImn最先發現了酶的固定化現象。科學家們就開始了同定化酶的研究工作。1969年日本一家製藥公司第一次將同定化的醯化胺基酸水解酶用於從混合胺基酸中生產L一氮基酸,開闢了固定化酶在工業生產中的新紀元。我國的固定化酶研究開始於1970年,首先是微生物所和I上海生化所的工作者開始了固定化酶的研究 。
傳統載體
1、吸附法
吸附法是最簡單的同定化方法.包括物理吸附和離子交換吸附。物理吸附法常用的吸附劑有活性炭、硅藻土、多空玻璃等。離子吸附法是酶與載體通過范德華力、離子鍵和氫鍵等作用力固定。
2、包埋法
包埋法的基本原理是載體與酶溶液混合後,藉助引發劑進行聚合反應,通過物理作用將酶限定在載體的格線中,從而實現酶固定化的方法。
3.載體偶聯法
載體偶聯法是指酶分子的非必須基團與載體表面的活性功能基團通過形成化學共價健實現不可逆結合的酶固定方法,又稱共價結合法。
4、交聯法
交聯法是利用雙功能或多功能交聯試劑,在酶分子和交聯試劑之間形成共價鍵的一種酶固定方法。已報導的利用幾丁聚糖、殼聚糖等為載體,在戊二醛、乙二醛等多功能試劑交聯-半乳糖苷酶、胃蛋白酶、脲酶等多種酶。
新型載體
邱廣亮 等用磁性聚乙二醇膠體粒子作載體,採用吸附——交聯法,製備出具有磁回響性的固定化糖化酶,簡稱磁性酶(MIE) 一方面由於載體具有兩親性,MIE 可穩定的分散於水相或有機相中,充分的進行酶催化反應;另一方面,由於載體具有磁回響性,MIE 又可藉助外部磁場簡單地回收,反覆使用,大大提高酶的使用效率。
Puleo 等將鈦合金表面用丙烯酸胺電漿處理引入氨基,然後將含碳硝化甘油接枝於鈦合金表面,或者將電漿處理的鈦合金先由琥珀酸酐處理,再用含碳硝化甘油接枝,進而將溶菌酶和骨形態蛋白進行固定,實現了生物分子在生物惰性金屬上的固定化。
無載體
1、交聯溶解酶
交聯溶解酶(Cross-LinkedQissolued Enzyme,CLEs)是通過交聯劑對酶分子直接交聯而獲得,也是操作最簡單的一種方法。
2、交聯酶晶體
交聯酶晶體(Cross-Linked Enzyme Crystals,CLECs)是近年來發展起來的新型酶晶體催化劑,是酶結晶技術和化學交聯技術的結合。
3、交聯酶聚合體
交聯酶聚合體(Cross-Linked Enzyme Aggregate,CLEAs)酶分子經沉澱形成不溶性酶聚集體再經交聯反應形成。
酶的定向
1、共價固定法
選擇性地利用酶分子表面遠離活性位點的特定稀有基團(如巰基) 進行反應,使該基團與載體上另一基團共價交聯來固定酶蛋白,使其活性中心朝向溶液方向,以達到控制其空間取向的目的。
2、胺基酸置換法
利用基因定點突變技術在蛋白質分子表面合適位置置換一個胺基酸分子,通過該胺基酸殘基特殊的側鏈基團控制固定方向。
3、抗體耦聯法
大多數抗體具有足夠的穩定性承受各種活化與偶聯方法。抗體分子中很多可供偶聯用的官能團。可以通過賴氨酸的- 氨基或末端氨基、天冬氨酸的- 氨基、谷氨酸的- 氨基或末端羧基進行一般性的偶聯。
4、生物素——親和素親合法
生物素是存在於所有活細胞內但含量甚微(