概述
分配柱色譜法又稱液-液柱色譜法,其固定相和流動相均為液體,液態固定相又稱固定液,被塗漬在惰性材料載體上構成固定相。分配柱色譜法的優點是:穩定性高,重現性好,適用樣品的類型廣等。分為正相色譜法和反相色譜法。其中正相色譜法流動相的極性小於固定相的極性,反相色譜法中流動相的極性大於固定相的極性。
基本原理
分配柱色譜法的分離原理是利用被分離的各個組分在互不相容的固定相和流動相中溶解度不同,在試樣組分隨流動相移動通過色譜柱的過程中,組分在兩相中不斷建立、打破和重新建立分配平衡。平衡時組分在固定相(s)和流動相(m)中的濃度之比成為分配係數。因為不同組分的分配係數不相同,他們在柱中經過多次的分配平衡後,產生了差速遷移,從何彼此分離。組分間分配係數K相差越大,越易分離。
固定相和流動相
1.固定相 分配色譜法的固定相是將固定液塗漬在有一定粒度的載體上構成。載體(又稱擔體)僅起負載一定量固定液的作用,它必須是惰性材料;不溶於固定液和流動相,也不與他們起任何化學反應,有較大的表面積,機械強度好。常用的載體如吸水矽膠、纖維素、多孔硅藻土和微孔聚乙烯小球等。分配色譜法要求固定液是樣品的良好溶劑,不溶或難溶於流動相。常用的固定液種類很多,如水、稀硫酸、甲醇、甲醯胺以及一些大分子的有機溶劑,如甲基矽油、聚乙二醇、角鯊烷等。
2. 流動相 分配色譜法的流動相種類較多,水、不同pH的溶液、緩衝溶液和不同極性的溶劑均可用作流動相。對流動相的要求是:1) 與固定液不互溶,極性相差較大;2) 對樣品組分的溶解度足夠大,又相對小於固定液對組分的溶解度。