冷凍切片套用
(1)在手術進行中,突然發現病人的病變與原診斷,原定手術方案不相符合,或者懷疑時,需要病理確定。
(2)了解淋巴結內是否有轉移的腫瘤細胞,或者轉移的程度,以利於確定是否需要徹底掃除淋巴結或者其它的治療措施。
(3)對於已確定為惡性腫瘤的患者,則需要了解其手術範圍是否足夠,上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。
(4)在做剖腹探查時所發現的腫塊或者異樣的組織。
(5)顯示組織中的脂肪和脂類物質,這常見於某些病例如脂肪瘤及肉瘤,某些科研組織等。
(6)某些酶的顯示如ATP酶,琥珀酸脫氫酶等。
(7)神經病理學技術中的某些染色法如:Eager氏法,Marchi氏法,Cajal氏法,Hortega氏法和Holzer氏法等。
(8)對某些物質所進行的免疫螢光的研究。
製作方法
以Shandon As 620 E型恆溫箱冷凍切片機為例,該機的箱面上有電子控制板,裝有即時冷凍鍵和除霜鍵,啟動即時冷凍鍵,機器馬上進行工作狀態,並可持續10mins。啟動即時除霜鍵,可將工作間頂部後面的製冷柵上的霜除掉,並可持續15mins。有照明鍵一個,啟動該鍵可照明工作間,有利工作及觀察組織的冷凍狀況。配有消毒鍵一個,當進行一周的工作或者一天的工作後,啟動該鍵,可對工作間進行消毒。當每天工作完畢時,可啟動密鎖鍵,鎖住工作間。除此之外,箱面的左邊有四個按鍵,兩個為快速自動進退鍵,兩個為微小進退鍵,還有一個手動旋鈕,調節修組織塊時的進退。 冷凍箱內左邊的冷凍台,溫度可達-60℃左右,冷凍箱的中間為一台切片機,工作間的溫度在0-30℃間可任意調節,並在箱面上的螢屏顯示出來。
注意事項
新鮮的組織
組織儘可能新鮮、驟冷愈快愈好,才能避免冰晶,常用的驟冷劑有:① CO2氣(-78℃) ② 丙酮乾冰冷卻的輕石油醚、乙烷和庚烷(-80℃) ③ 液氮(-190℃)④ 液氮冷卻的丙烷(-19℃)。液氮適用於組織化學,較安全。缺點:組織塊易發生龜裂。
固定組織
為防止水解酶和其他物質的移位、彌散,常用4℃、24小時的甲醛固定能很好地保存酶類。但對許多脫氫酶和轉移酶能滅活。故不宜使用,低溫,冷甲醛短時間固定(10分鐘左右)固定,可顯示琥珀酸脫氫酶。 電鏡出現後,需要保存細胞的超微結構,以4%緩衝戊二醛(25%戊二醛16ml;0.1M二甲胂酸(pH7.)84ml;蔗糖8g)固定較好。這些固定液主要用於水解酶,而不適於許多氧化還原酶和轉移酶。
恆冷箱溫度
一般在冷凍後10分鐘,到接近冷室溫度時再切,一般組織在-15~-20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度,Pearse及Bancroft的經驗如下:
組織 刀溫度 組織溫度 恆冷箱溫度
肝 -18 -10 -5 腎 -15 -8 -5 皮膚 -35 -10 -5 腦 -18 -5 -5 固定組織一般高3-5度
切片機的使用
抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離,使切片平滑通過。抗卷板略高於刀面的最高點。可憑經驗調整刀對組織的角度,一般新刀為20゜。操作程式:先接通電源,調定恆冷箱溫度,調整切片刀的角度,調定切片厚度,標本置載台致冷達所需溫度後,將其安放在切片機推進器上。即可切片。 恆冷箱視使用情況每周或每月清潔一次冰霜。新刀切片滿意,舊刀用自動磨刀機磨刀較好。如果切片刀與抗卷板的位置,角度合乎要求,又有一把銳利的刀,就能獲得理想的切片。