Sephrose 2B柱純化質粒DNA
鹼法提取的質粒DNA即使用RNA酶處理,仍會含有少量RNA。當有些試驗需無RNA污染的DNA製品時,則需進行進一步純化。一般常用Sepharose 2B或Sepharose 4B進行純化,該方法具有快速,條件溫和,重複性好,載體物質可以再利用等優點,因而已廣泛用於質粒DNA純化。
方法
1、將Sepharose 2B經含0.1% SDS的TE（pH8.0）平衡後上柱。
2、將至多1ml的DNA溶液鋪在Sepharase 2B柱上。
3、待DNA溶液完全進入柱內後立即在柱的上部連線含有0.1% SDS的TE(pH8.0)貯液瓶。
4、以1ml流出液為1份進行收集。
5、對每一管測定其OD260值,以確定哪些管中含有質粒DNA。通常質粒DNA在柱上流出的第一個峰中。
6、合併所有含質粒的洗脫液,用等體積的酚/氯仿(1:1)抽提,4℃下12000g離心2分鐘,將上層水相轉入新管。
7、加入2倍體積的冰冷無水乙醇，-20℃下沉澱10分鐘,然後4℃下12000g離心10分鐘,棄去上清液。
8、沉澱加70%乙醇洗滌,4℃下12000g離心10分鐘,棄去上清液。
9、 沉澱真空抽乾,重新溶於TE或無菌水中。
【注意】
在裝柱過程中,要防止柱床中出現斷裂或氣泡現象,要使界面保持平整。對新裝成的柱,套用含0.1% SDS的TE平衡, 以使柱內的凝膠均勻。
