特點
對於5'突出或3'突出的粘末端都可以催化產生平末端,用於後續的平端連線。
用途
雙鏈DNA5'突出(5'overhang)末端的補平(fill-in);雙鏈DNA3'突出(3'overhang)的打平(也稱削平);5'突出末端的標記;隨機引物法進行DNA標記;Sanger雙脫氧法進行DNA測序;cDNA第二鏈的合成或定點突變反應第二鏈的合成。
來源
由大腸桿菌表達,表達基因的來源為polA 基因片段。
簡介
分子量:約68kDa(單體)。
活性定義:37℃30分鐘時間內,催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個活性單位。
酶活性檢測條件:67mM potassium phosphate(pH7.4),6.7mM MgCl,1mM 2-mercaptoethanol,0.033mM dATP,0.033mM dTTP,0.4MBq/ml[H]-dTTP,62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
純度:不含DNA內切酶,不含RNase。
酶儲存溶液:25mM Tris-HCl(pH7.5),0.1mM EDTA,1mM DTT,50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃),50mM MgCl,10mM DTT。
緩衝液兼容性:在碧雲天的內切酶反應緩衝液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性為100%,在1X B、1X G中的活性為100%;在碧雲天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反應緩衝液中的活性為100%。
失活或抑制:75℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導致KlenowFragment失活。金屬離子螯合劑,無機焦磷酸鹽(PPi),大劑量的無機磷酸鹽(Pi)均對Klenow Fragment有抑制作用。