定義
His標籤單抗,又叫6×His標籤單抗,或6×His單克隆抗體,英文全稱為anti-6*His tag monoclonal antibody,因為製備單抗的實驗動物多為小鼠,所以小鼠來源的His標籤抗體英文全稱為Mouse anti-6*His tag monoclonal antibody。 目前市場上用到的His標籤單抗基本都是用小鼠製備的,尚未有商品化的兔源His標籤單抗。
標籤鼠單抗
以實驗小鼠為宿主製備的His標籤單抗叫His標籤鼠單抗。 其製備方法通常是這樣的:人工合成6*His多肽,即胺基酸序列為HHHHHH的多肽,必要時在末端添加偶聯載體用到的特殊胺基酸。合成好此多肽後,通過化學方法將此多肽與載體蛋白偶聯(如KLH、BSA、OVA等),偶聯完成後,再用偶聯好的全抗原免疫實驗小鼠,免疫結束後殺死免疫好的小鼠,無菌條件下取脾臟,與骨髓瘤細胞進行融合,用ELISA或者其它手段進行篩選出陽性的克隆,篩選到的細胞經過克隆化後即形成穩定的細胞株,將此細胞株進行體外培養或小鼠體內誘生腹水形成,再從培養基或者腹水中純化即可得到His標籤鼠單抗,再用Western blot或其它手段進行鑑定即可。 目前世界上有很多公司都提供商品化的His標籤單抗,右圖是Proteintech Group的His標籤單抗(產品編號66005-1-Ig)的Western blot結果,可見在曝光時間為1min的情況下,抗體稀釋16萬倍仍可檢測到很強信號。
背景介紹
His標籤是蛋白質重組技術中經常用到的一種標籤,其序列為六個組氨酸HHHHHH, 其特點是分子量小,基本不改變蛋白質的生物結構,不改變蛋白質的溶解性,更重要的是它使蛋白質的純化變得極為方便,根據組氨酸上的咪唑環可以與二價金屬離子結合的原理,人們可以利用金屬離子親和層析技術純化帶有His標籤的蛋白,即將含有目的蛋白的裂解液通過固定的二價金屬離子(通常是二價Ni離子)填料,帶有6*his標籤的蛋白質即與填料結合,其它蛋白不與填料結合,最後再用高濃度的咪唑即可將目的蛋白洗脫下來。
His標籤單抗可以用來鑑定His標籤的蛋白質的表達情況(如目的蛋白的相對表達量、分子量)、在細胞中的定位以及其它特性。