概述
丁型肝炎病毒抗原存在於受感染的細胞內和外周。丁型肝炎病毒急性感染早期,於B型肝炎病毒表面抗原陽性期內可在血液中檢出丁型肝炎病毒抗原,持續1~2周;慢性感染時可持續保持於低滴度水平。
別名
δ肝炎抗原;丁型肝炎抗原
HDAg的醫學檢查
檢查名稱
HDAg
分類
血清學檢查 > 病毒的血清學檢查
化驗取材
血液
HDAg的測定原理
丁型肝炎病毒抗原外被B型肝炎表明抗原(HBsAg)包裹,當用除污劑(Tween20或NP40)裂解後才被釋放出來,利用抗原抗體特異性結合的免疫學原理,套用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法進行檢測。
試劑
(1)抗-HDV IgG純化抗體用於包被。
(2)HRP-抗HDV抗體。
(3)具有中和活性的抗HBc單克隆抗體ELISA滴度1∶10萬,用於稀釋HRP-抗HD。
(4)10%Tween 20。
(5)其它器材和溶液均同上。
操作方法
(1)取包被液稀釋抗-HDV IgG包被聚苯乙烯板,每孔100μl放37℃1h,4℃過夜。
(2)洗3次後,每孔分別加入待檢血清和陰、陽性對照血清50μl(陰性對照血清孔,陽性對照血清2孔)和10%Tween20 50μl,充分混合均勻後放室溫過夜,使之裂解丁肝病毒表面包裹的HBsAg釋放丁肝抗原。
(3)洗3次後,每孔加入50μl HRP-抗HDV抗體(稀釋液中除含10%小牛血清外還含有10個ELISA單位的抗HBc單克隆抗體),放45℃1h(或37℃2h)。
(4)洗3次後,每孔加50μl新鮮配製的底物液,放室溫暗處顯色15~30min後每孔加25μl 2mol/L H2SO4終止反應。
正常值
(1)目測法:棕色或黃色為丁型肝炎抗原陽性,無色為陰性。
(2)比色法:套用酶標儀測定波長492nm的光吸收值(A),根據樣品的A值和陰性對照A平均值計算S/N值或閾值,凡樣品S/N值≥2.1或大於閥值為陽性,反之為陰性。
閾值=陰性對照A492平均值×2.1。
化驗結果臨床意義
丁型肝炎病毒抗原,存在受感染的肝組織細胞內,外周血的完整病毒內,患者外周血中丁型肝炎抗原陽性表明體內有丁肝病毒複製,血中有丁型肝炎病毒。
附註
(1)由於丁型肝炎與B型肝炎感染同時存在,外周血經除污劑處理後,可能HBAg與HBcAg同時存在,因此要注意注意防止HBcAg的干擾,故酶標記物中必須加入非標記的特異性中和HBcAg的單克隆抗體以排除之。
(2)由於外周血中抗原量少,血清不宜稀釋至少要用30~50μl。
(3)測定結果最好用比色法,以免造成假陽性或假陰性。
(4)對可疑標本建議進行重複試驗。