簡介
E花環形成試驗是指通過花環形成檢查T細胞的方法。T細胞表面具有能與綿羊紅細胞（SRBC）表面糖肽結合的受體，稱為E受體（CD2）。已證實E受體是人類T細胞所特有的表面標誌。當T細胞與SRBC混合後，SRBC便粘附於T細胞表面，呈現花環狀。根據花環形成的多少，可測知T細胞的數目，從而間接了解機體細胞免疫功能狀態，判斷疾病的預後，考核藥物療效等。
實驗材料
1.肝素抗凝靜脈血、Hanks液、小牛血清、淋巴細胞分離液、1%綿羊紅細胞懸液、0.8%
戊二醛、瑞氏染液
2.吸管、毛細滴管、玻片、試管、水平離心機、顯微鏡。
實驗方法
（一）淋巴細胞的分離
1.取2～3ml肝素抗凝靜脈血（加肝素200U/ml抗凝），用Hanks液稀釋1倍，混勻。
2.取2～3ml淋巴細胞分離液加入15mm×150mm試管中。
3.用毛細滴管吸取稀釋血液，在距分離液面上1cm處，沿管壁徐徐加入，使稀釋血液重疊於分層液上（儘量避免沖入分層液中）。稀釋血液與分層液體積比為2∶1。
1.2000轉/分，水平離心20分鐘，小心取出試管，結果見圖。
2.用毛細吸管輕輕插到血漿與分離液的界面層，沿試管壁周緣吸出富含淋巴細胞的灰白色層即單個核細胞層，移入另一試管中。
3.加入5倍以上體積的Hanks液混勻，離心1500轉/分，10分鐘，棄上清液，將沉澱細胞振搖重懸後加Hanks液同法洗滌2次。
4.最後用營養液配製成1～2×106/ml細胞懸液。
1．取上述淋巴細胞懸液加入等量1%綿羊紅細胞懸液、0.1ml小牛血清，混勻。
37℃水浴5分鐘，500轉/分，離心5分鐘，放4℃冰櫃20分鐘。
2．棄去適量上清，輕輕搖勻，加0.8%戊二醛1滴，混勻後置4℃冰櫃15分鐘。
3．取出後輕輕混勻塗片，自然乾燥。
4．瑞氏染色，將瑞氏染液加於玻片上先染1分鐘，再滴以等量的蒸餾水，輕輕晃動混勻，繼續染5分鐘水洗，乾後鏡檢。
結果觀察
油鏡檢查：淋巴細胞呈藍色，SRBC呈紅色圍繞淋巴細胞形成花環，凡表面粘附有3個或3個以上SRBC者為花環形成細胞（即E陽性細胞）。
計數200個淋巴細胞，算出花環形成百分率，並推測其T淋巴細胞百分率。正常值為：50～80%。
注意事項
1．向分離液管加血液時應沿試管壁緩緩加入，使血液與分離液形成明顯的界面，小心放取試管，避免打亂界面，影響分離效果。
計數及搖勻細胞時動作應輕柔，避免打散已形成的花環。
