DNA微陣列實驗指南

DNA微陣列實驗指南

《DNA微陣列實驗指南》是2008年1月1日由科學出版社出版的圖書,作者是D.鮑特爾、J.薩姆布魯克。、

基本信息

內容簡介

本書提供了權威而詳細的有關DNA微陣列設計,構造和套用的知識,同時還詳盡地闡述了軟體工具的套用和數據分析要求,使一本非常實用的工具書。

DNA微陣列技術是一項能夠分析基因組、基因表達特徵性圖譜的新技術。目前,DNA微陣列技術已被植物、動物和生物醫學等領域廣泛套用,本書內容全面、實驗步驟翔實,集合了諸多前沿領域專家的理論知識和實踐經驗。

本書可供從事生物晶片研究開發以及生物信息學、分子生物學、生物技術等相關領域的教學科研人員和技術人員參考使用。

圖書目錄

譯者序
原著序
前言
原著作者名單
第1章 點樣微陣列探針的生成
導言
方案
1.cDNA克隆集的複製和儲存
·附加方案:使用冷凍菌種
2.來自細菌克隆集探針的PCR擴增
·可選方案:作為擴增模板的質粒DNA的製備
3.PCR產物的純化
·可選方案:用乙醇沉澱法純化擴增產物
4.PCR產物的觀察和評估
·附加方案:用PicoGreen進行定量
5.點樣法陣列備用DNA的重新懸浮及儲存
6.從酵母中分離和擴增用於陣列的材料
信息欄
克隆集
點樣微陣列中使用的對照
基因組和cDNA文庫中T1噬菌體的預防和檢測
長鏈寡核苷酸的點樣:替代用於表達分析的cDNA陣列
酵母探針
參考文獻
網際網路資源
第2章 玻璃微陣列的點樣
導言
方案
1.製備用於微陣列的聚L-賴氨酸玻片
2.在玻片上點樣
3.檢查印刷玻片的質量
·替代方案:利用標記的引物雜交
4.鵝毛筆針的保養與清洗
信息欄
微陣列接觸印刷使用的點樣儀與點樣針
用於點樣的基底
參考文獻
網際網路資源
第3章 RNA的表達分析
導言
PART Ⅰ  RNA分離
導言
方案
1.來自哺乳動物組織和細胞的總RNA的純化
·替代方案:從OCT包埋的病理樣品中提取RNA
2.用FastPrep儀器從組織中分離總RNA
3.用TRIzol從植物組織中分離總RNA
4.松樹方法分離植物RNA
5.用FastTrack分離poly(A)+RNA
6.分離膜結合的多核糖體RNA
7.用批量製備色譜法分離poly(A)+RNA
8.用CsCl溶液超速離心分離RNA
9.酵母總RNA的純化
·替代方案:用鎖相膠純化RNA
10.E.coli RNA的純化
11.從單細胞和少量組織中分離和擴增RNA
·替代方案:組織切片中RNA的原位轉錄
·附加方案:切片的吖啶橙染色
12.RNA通用參考集
PART Ⅱ  標記和雜交
導言
方案
13.用反轉錄酶進行cDNA第一鏈的螢光標記
·替代方案:螢光標記的cDNA的純化和濃縮(Microcon YM-30)
14.用氨基烯丙基染料對DNA進行間接螢光標記
15.用於為篩選DNA微陣列篩選產生靶序列的mRNA製備物的擴增
·附加方案:標記aRNA
16.用於表達分析的少量mRNA的擴增
17.用E.coli DNA聚合酶的Klenow片段標記第二鏈DNA
·替代方案:用E.coli DNA聚合酶的Klenow片段標記基因組DNA
18.用生物素化核苷標記擴增RNA來與寡核苷酸陣列雜交
·附加方案:生物素化cRNA的片段化
19.未摻入的Cy染料的回收:使用HPLC重新純化
20.雜交和雜交後洗滌
·附加方案:微陣列玻片的疊放
疑難解答指南
信息欄
Alexa染料
細菌微陣列
用酚抽提蛋白質和DNA
甲醯胺
採用胍鹽抽提RNA
動物細胞及組織的勻漿
抑制RNase
哺乳動物、植物和細菌的RNA
測量DNA染料標記的效率
鼠白血病病毒反轉錄酶
oligo-(dT)纖維素
RNA的定量
RNA操作的特別注意事項
RNA的保存和回收
參考文獻
網際網路資源
第4章 膜點樣cDNA陣列
導言
PART Ⅰ  膜陣列的製備和雜交
方案
1.膜陣列的點樣
2.RNA的製備和標記
3.靶分子與膜陣列的雜交
·附加方案:靶分子的清除和膜的重新利用
PARTⅡ  數據的分析和解釋
參考文獻
網際網路資源
第5章 組織顯微切割
導言
PART Ⅰ  徒手顯微切割和雷射俘獲顯微切割
導言
方案
1.徒手顯微切割
·替代方案:冰凍組織樣品的顯微切割
2.雷射俘獲顯微切割
3.免疫-LCM
4.套用於表達分析的顯微切割組織的處理
PART Ⅱ 雷射壓力彈射
導言
方案
5.準備載玻片用於為LMPC進行組織切片
6.用於LMPC的石蠟包埋組織切片的製備
7.用於LMPC的新鮮冰凍組織切片的製備
8.使用Zincfix固定組織的LPC用於mRNA譜分析
9.使用液體蓋玻片保護組織樣品
10.雷射顯微切割和彈射後活細胞的分離
參考文獻
網際網路資源
第6章 基因組微陣列分析
導言
PART Ⅰ  微陣列檢測DNA拷貝數
導言
方案
1.cDNA微陣列比較基因組雜交
2.製備BAC DNA用於通過連線介導PCR進行CGH
3.BAC 基因組微陣列CGH
4.基於微陣列的DNA拷貝數代表性分析:靶DNA製備
5.基於微陣列的DNA拷貝數代表性分析:玻片製備及雜交
PART Ⅱ  突變檢測及SNP基因分型
導言
方案
6.SBE-標籤陣列用於SNP基因分型
·替代方案:為SBE進行多重擴增反應
7.Affymetrix標籤陣列用於SBE SNP基因分型
8.高密度微陣列用於序列變異檢測
9.SNP陣列用於雜合性缺失分析
PART Ⅲ  基於微陣列的DNA-蛋白質相互作用檢測:微陣列上的染色質免疫沉澱
導言
方案
10.套用陣列對酵母基因組上DNA-蛋白質相互作用作圖
11.酵母基因組的DNA-蛋白質相互作用作圖:DNA擴增及標記
PART Ⅳ  SNP序列:作圖數據
·表6-7  多重引物集合:SNP作圖數據
·表6-8  Affymetrix HuSNP晶片中的SNP在圖譜上的位置
參考文獻
網際網路資源
第7章 基因晶片生物信息學簡介
導言
PART Ⅰ  微陣列表達實驗的設計
PART Ⅱ  圖像分析
PART Ⅲ  標準化
PART Ⅳ  晶片數據的表示和評價
PART Ⅴ  LIMS、資料庫和數據管理
PART Ⅵ  聚類分析與顯示
PART Ⅶ  多維尺度法和自組織圖
信息欄
基因注釋
在研究人員之間共享微陣列數據
參考文獻
網際網路資源
第8章 組織微陣列
導言
方案
1.製備組織微陣列
·附加方案:手工製備組織陣列
2.套用組織陣列進行原位雜交
3.組織陣列上的免疫組織化學
·替代方案:抗原去隱蔽和胰蛋白酶消化
參考文獻
網際網路資源
附錄
附錄1  構建全長基因文庫
附錄2  試劑、緩衝液和培養基
附錄3  注意事項
附錄4  供應商
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中文版索引
原著索引
圖版

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