C肝病毒基因擴增檢測

從患者血清或血漿中提取HCV RNA，在逆轉錄酶作用下將RNA逆轉錄為 cDNA，在引物的指導下，以四種脫氧核苷酸為底物，在耐熱DNA聚合酶的酶促作用下，對cDNA進行擴增，用Taqman探針法檢測擴增產物。通過標準曲線與CT值，即可計算出被檢血清中HCV RNA的含量。

實驗目的

明確C肝病毒核酸定量檢測的操作規程，指導檢驗人員正確進行C肝病毒核酸定量檢測的操作，保證檢測結果準確可靠。

標本要求

1.標本類型：血清。
2.標本儲存和運輸：室溫運輸，採樣後儘快送檢。室溫放置不超過2小時，4℃～8℃不超過72小時，-70℃保存期6個月，應避免反覆凍融。
3.標本拒收狀態：細菌污染、嚴重溶血或脂血標本不能作測定。

程式步驟

1.標本採集和運送：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血3～4mL，注入無抗凝劑的採血管內，於室溫靜置0.5小時，3000rpm離心5分鐘，吸取500μL血清（注意勿帶入紅細胞和纖維蛋白）轉入另一無菌1.5mL離心管並標記，即為血清標本。標本可立即用於測試（48小時以內），也可保存於-70℃待測，保存期為6個月。
2.標本及對照標準品的處理：按照實驗室使用的試劑說明書操作。
3.PCR擴增及檢測：按照實驗室使用的試劑說明書操作。

臨床意義

為C型肝炎病毒感染提供診斷依據，並可作為C型肝炎抗病毒治療療效觀察依據。