DNA檢測
以往B肝患者抗病毒治療的指征是:B肝病毒e抗原陽性(大三陽)患者HBVDNA數值要求達到10的5次方拷貝/毫升(20000U/ml),B肝病毒e抗原陰性(小三陽)患者B肝病毒DNA數值要求達到10的4次方拷貝/毫升(2000U/ml),但是10的4次方拷貝/毫升以下也不能認為就沒有問題了,最新的國際研究資料表明:和肝臟疾病進展相關的病毒DNA水平域值尚不清楚,即使HBVDNA水平持續低於20000U/ml,也可能B肝病毒情仍在進一步發展,因此HBVDNA數值應該越低越好,目前國際建議的HBVDNA檢測正常值應該是:< 50U/ml 。
作用
目前,B肝病毒DNA檢測在B肝檢查化驗中使用的越來越普遍,可見B肝病毒DNA檢測在B肝檢查化驗中占的分量越來越重,這是因為B肝病毒DNA檢測對確診B肝和評估B肝治療效果具有十分重要的作用。主要表現在以下七個方面:
1、了解B肝病毒在體記憶體在的數量。
2、B肝病毒是否複製。
3、B肝是否傳染,傳染性有多強。
4、是否有必要服藥。
5、肝功能異常改變是否由病毒引起。
6、判斷病人是適合用哪類抗病毒藥物。
7、判斷藥物治療的療效。
臨床意義
所以說HBV—DNA定量檢測指標降低在B肝治療中有著非常重要的意義,是B肝轉陰的前奏,也是康復最為關鍵的一步,只有體內的HBV—DNA定量指標降低,病毒的複製繁殖才會停止,B肝的徹底治癒才有希望。
B肝病毒DNA檢測的臨床意義一、對醫生的診斷和用藥非常重要。通過B肝病毒DNA檢測能夠判定判斷B肝患者適合用哪類抗病毒藥物;B肝病毒DNA檢測對用藥的劑量、用藥時間、是否需要聯合用藥以及用藥的效果等提供重要的參考依據,也是臨床上評價抗病毒或免疫增強藥物療效的最客觀的指標。
B肝病毒DNA檢測的臨床意義二、能夠直接反映B肝病毒複製狀態及傳染性的最佳指標,通過B肝病毒DNA的含量能直接反映病毒在體記憶體在的數量、是否傳染,傳染性有多強。但是需要說明的一點是:B肝病毒載量的多少並不代表肝臟的損傷程度,也無法判斷病情的嚴重程度。
B肝病毒DNA檢測的臨床意義三、反映病毒複製的活躍程度,間接地反映機體的免疫應答水平。
複製過程
不同於一個真正的生物體,病毒並不通過生長和分裂等方式繁殖自身,而是像鑄造機器零件一樣,按照一定的模具拷貝出來的。病毒DNA中包含有一些程式,指導病毒的遺傳物質和其它一些結構蛋白組分增殖。另外,病毒DNA中還包含有一些信息,使得單一組分能夠在細胞因子的幫助下,自發組裝成新的病毒顆粒。
在醫學上,病毒的繁殖被稱之為“複製”,在複製的過程中,有兩個很重要的因素:一個是催化劑,另一個是模板。沒有這兩個因素,B肝病毒就不能複製。B肝病毒複製的“催化劑”就是B肝病毒DNA(即HBV-DNA)聚合酶。沒有這種聚合酶的作用,B肝病毒的複製就會停止。
B肝病毒的基因組(HBV-DNA)是由兩條螺旋的DNA 鏈圍成的一個環形結構。其中一條較長負鏈已經形成完整的環狀;另一條長度較短的正鏈,呈半環狀。在感染肝細胞之後,這條半環狀的DNA鏈就會以負鏈為模板,在催化劑──HBV-DNA聚合酶的作用下延長,最終形成完整的環狀。這時的B肝病毒基因組就形成了一個完全環狀的雙股DNA。把這種DNA稱做共價閉合環狀DNA(即cccDNA),可以把它看作是病毒複製的原始模板。模板形成後,病毒基因會以其中的一條cccDNA為模板,利用肝細胞基因中的酶和DNA 聚合酶的“催化”,一段基因又一段基因地複製,形成負鏈和正鏈。最後再裝配到一起形成新的HBV-DNA顆粒。
第一步:黏附
HBV人侵人體後,依靠其外膜(表面抗原,HBsAg)能粘附在肝細胞膜上,當然,粘附的首要條件是HBsAg先要識別肝細胞膜。一旦粘附成功,HBv的外膜也就完成了它的使命,甩掉了外膜,HBV鑽進肝細胞內。
第二步:脫殼
HBV核心部分來到肝細胞內,在肝細胞漿中還要脫掉它的“核殼”(核心抗原即HBcAG及E抗原即HbEAG),這樣,就暴露出了它最核心部分,即B肝病毒核酸(HBv DNA),HBV大有“赤膊上陣”之意。HBV-DNA包涵著B肝病毒的全部基因,是它主宰著HBv的複製的。
第三步:入核
HBv-DNA從肝細胞漿內進入肝細胞核,在這裡它要進一步發育完善,形成了HBv的“共價閉合環狀脫氧核塘核酸”(HBv cccDNA)。這個cccDNA十分了得,它深深藏匿在肝細胞核內,而肝細胞核外面有一層堅韌的核膜,目前所有藥物都難以通過這堅韌的核膜,因而對cccDNA也無可奈何,但cccDNA卻掌控著HBv所有的遺傳信息,指令著HBv的複製。因此.現有的藥物想徹底消滅人體內的HBv真比登天還難,這些藥物只能抑制HBv的繁殖或複製,“全部轉陰”也只能是一種幻想。
第四步:轉錄
HBV在這一階段會以cccDNA為“模子”,像錄音帶似的把HBv cccDNA上的所有信息全都轉錄到“信息核糖核酸”(mRNA)上。這個轉錄過程需要人體內的酶類幫忙,因為所有的病毒都不能自己獨立生活.必須有生物的機體幫忙,才能完成這個轉錄過程。HBv也是這樣。在人體酶類的幫助下完成它的複製環節。
第五步:翻譯
在mRNA上已錄取了HBv的所有信息,然後就是“翻譯”了,其實就是開始製造病毒蛋白。MRNA通過“翻譯”過程,可將HBv的各種蛋白製造出來,如HBv的外膜蛋白(HBsAg)、核殼蛋白(HBeAg、HBcAg)、HBvDNA多聚酶等;至此,HBv的外膜有了,HBv的核殼也有了,這些東西只是零件,飄浮游離著的,還有重要的HBv最核心部分沒有“製造”山來。
第六步:逆轉錄
啥叫“逆轉錄””把HBv的遺傳信息從DNA轉錄到RNA上叫做“轉錄”,是正常的“順轉錄”;而將HBv的遺傳信息從RNA上再轉錄到DNA上,就叫做“逆轉錄”了。那么,HBv的mRNA上的遺傳信息最後就轉錄成了HBV的DNA,這時,HBv的最核心部分(即HBv DNA)也算製造完成。
第七步:組裝
從第五步和第六步的複製看來,HBv的所有零件均已製作完畢,到了第七步也就簡單了,把這些零件進行組裝,裝配妥了,HBv的複製也算大功告成了。
HBv就是這樣繁殖或複製的。看起來好像挺複雜,其實HBv複製過程是很快的.一個複製周期不到48小時。複製出的下一代HBv或侵入另外的健康的肝細胞,或被釋放到血液中去,在人們抽血化驗時也就被檢測到了。
頻率
無論是大三陽還是小三陽的病人,發現患有B肝的時候就建議檢測HBV DNA。一般來說,病人的具體情況可能會不太一樣,如果在一個病毒的活動期,B肝病毒DNA檢測可能需要勤一些,一到兩個月就應檢測一次,如果是在病毒的耐受期,病情相對比較穩定,可以3—6個月檢測一次。在進行抗病毒治療的過程中,也是需要定期檢測HBV DNA。一般來說至少三個月要檢查一次。
注意事項
檢查注意事項:
1、 這個檢查與是否進餐沒有任何關係,所以如果你只做HBV DNA檢查,可以檢查前進餐.
2 、如果你還要做肝功能檢查,建議你在檢查前避免進,避免熬,避免酗酒,避免用藥,女性生理期避免做肝功能檢查。
對於B肝結果的認識,有這幾點注意事項:
1、關於單位的換算.最常見的單位是copies/ml,也有重量的單位,比如fg/ml,pg/ml.1 pg = 1000 fg,那么1 pg/ml = 283,000 copies/ml.
2、由於PCR的方法雖然精確度,但是誤差相對較大,而且假陽性率也比較,所以,對於每次B肝DNA檢查的結果,在兩個數量級之內的變化,通常會認為沒有變化或變化不大.而且DNA也在不斷的波動,所以不能以一次或兩次的檢查結果就簡單的判斷是否好轉,應該綜合其它結果以及DNA的變化趨勢。
3、對於B肝陰性的標準,我們一般認為是10的3次方,但不能一概而論,應該視化驗單上具體給出的參考值而定.陰性最準確的表達方式是,未檢測到,化驗單表示為<參考值copies/ml,並沒有具體的數值。
4、DNA複製程度的大小並不代表肝臟實際損害的程度,DNA複製程度高,並非就代表損害嚴重。
檢測方法
主要有:螢光定量PCR技術、競爭PCR技術、PCR酶聯免疫吸附法、螢光標記引物法和PCR酶聯化學發光法。
臨床上最先進的B肝病毒DNA檢測方法是實時螢光定量PCR方法,由於此技術要求較高,目前只有少數大型醫院有條件使用實時螢光定量PCR方法。
檢測報告
1、B肝病毒DNA檢測報告:主要包括定性和定量。
2、定性,即確定是陰性還是陽性。B肝病毒DNA的正常值為陰性,即B肝病毒DNA<1x10的3次方拷貝/ml
3、定性測得的陽性通常說明病毒容易傳染給他人,陰性說明不容易傳給他人。對於B肝大三陽來說,由於B肝病毒e抗原(HBeAg)是陽性,所以B肝病毒-DNA也是陽性的,表示B肝病毒-DNA>1 x 10的3次方拷貝/ml ,這時體內的B肝病毒複製活躍。
4、定量,即檢測B肝病毒在血液中的含量。定量檢測結果主要是對抗病毒治療提供檢測和療效參考。由於結果是數字的,而不是“高/低”、“陰/陽”、“正常/不正常”,所以看起來比較麻煩。確定正常值指標一定要知道所做實驗的參考範圍。參考範圍因檢測儀器、方法、試劑的不同而有差異。
5、“+”:陽性,體內病毒存在複製。對應於定量方式中HBV-DNA>1x10E3 copies/ml。
6、“-”:陰性,病毒的複製程度低於檢測限。對應於定量方式中HBV-DNA<1x10E3 copies/ml。
7、定量:HBV-DNA定量單位在報告單上通常用“copies/ml”、“拷貝數/ml”或“IV/ml”表示,表示每毫升的血清或血漿中病毒基因組的個數,該數據越大,表明病毒在人體的複製越厲害,例如“HBV-DNA=4.3x10E3 copies/ml”代表每毫升血清中有4.3乘以10的3次方,也即4300個B肝病毒。
檢測費用
B肝患者到醫院檢查確診病情或者複查時,都要進行B肝病毒DNA檢測,這一檢測項目已經成為觀察B肝病毒實際情況的最重要和最關鍵的指標,在抗病毒治療時,也需要進行B肝DNA病毒檢查。
B肝病毒DNA檢測費用受不同因素的影響而有一定差異。B肝病毒DNA檢測費用大概在100元左右。如果用進口試劑化驗定量大約需要150-200元。
B肝病毒DNA檢測系統技術要求嚴格,對肝病醫院人員,醫療技術,環境有很高的要求,只有正規,具備一定等級的大型醫院具備B肝HBV-DNA檢測系統的資格。
檢測要空腹嗎
單純檢測B肝病毒DNA時是不需要空腹的,這主要是因為B肝病毒DNA指的是B肝病毒的核心物質和病毒複製的基礎,是不受飲食、運動以及休息等因素影響的,也就是說進不進食食物是不會直接影響B肝病毒DNA檢測結果準確性的,所以說單純檢測B肝病毒DNA時是不需要特別注意空腹的。但如果在檢測B肝病毒DNA的同時需檢測肝功能、肝臟B超等則應注意空腹檢測。
B肝病毒DNA檢測的作用
B肝病毒DNA定量檢測是判斷B肝病毒複製的常用手段,其檢測意義主要有以下幾種:
1、B肝病毒DNA檢測可說明B肝病毒的複製狀況:如B肝病毒DNA測定值>1000copies/ml,常提示病毒有複製,而且拷貝數的高低與病毒複製的程度成正相關;若結果陰性,則表明病毒處於不活躍階段,病情比較平穩。
2、B肝病毒DNA檢測:判斷B肝病毒傳染性強度的重要指標:一般來說如B肝病毒DNA測定值>1000copies/ml,常提示具有傳染性,且檢測值越高就說明B肝病毒複製越活躍,傳染性越強。
3、B肝病毒DNA檢測可為臨床治療提供可靠的依據:B肝抗病毒治療的標準為B肝病毒DNA>1000copies/ml,且轉氨酶升高超過正常值兩倍以上者;對一些肝臟有進行性損害(經肝穿活檢證實)、B肝病毒dna陽性者,即使肝功能正常,必要時也應考慮抗病毒治療。
4、可評價B肝抗病毒治療效果的依據:在治療過程中應定期檢測、記錄B肝DNA的檢測結果,以作比較,觀察抗病毒療效,如抗病毒治療3個月或半年,B肝病毒DNA仍不轉陰或下降少於2次方,則提示該藥物抗病毒療效欠佳,可考慮停藥或換用其他抗病毒藥。
5、其他:B肝病毒DNA檢測結果在一定程度上可以輔助判斷B肝病毒是否產生了變異,如在治療過程中B肝病毒dna檢測結果由陰性轉為陽性時,則提示病毒已發生變異,應結合具體病情重新選擇抗病毒藥物。