運載體

運載體

運載體(Vector),一是用它作為運載工具,將目的基因轉移到受體細胞中去;二是利用它在受體細胞內對目的基因進行大量的複製(稱為克隆)。最終在受體細胞中表達大量目的基因產物,經分離純化被人們利用。

基本信息

作用

在基因操作過程中使用運載體有兩個目的:

運載體 運載體

一是用它作為運載工具,將目的基因轉移到宿主細胞中去; 二是利用它在宿主細胞內對目的基因進行大量的複製(稱為克隆)。

分類

常用的運載體主要有兩類:

一類是細菌細胞質的質粒,它是一種相對分子質量較小、獨立於擬核區DNA之外的環狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千鹼基對),有的一個細菌中有一個,有的一個細菌中有多個。質粒能通過細菌間的接合由一個細菌向另一個細菌轉移,可以獨立複製,也可整合到細菌擬核DNA中,隨著擬核DNA的複製而複製。

另一類運載體是噬菌體或某些病毒等。

除以上兩類外,人們還在不斷尋找新的運載體,如葉綠體或線粒體DNA等也有可能成為運載體。

條件

作為運載體必須具有四個條件:

①在受體細胞中能保存下來並能大量複製;

②有一個至多個限制酶切點,而且每種酶切位點最好只有一個,如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點,可適於多種限制酶切割的DNA插入;

③有一定的標記基因,便於進行篩選。如大腸桿菌的pBR322質粒攜帶氨苄青黴素抗性基因和四環素抗性基因,就可以作為篩選的標記基因。

④對受體細胞無害。

一般來說,天然運載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據不同的目的和需要,對運載體進行人工改建。現今實際所使用的質粒載體幾乎都是經過改建的。

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