病原
偽狂犬病毒屬於皰疹病毒科(Herpesviridae)、豬皰疹病毒屬,病毒粒子為圓形,直徑150~180nm,核衣殼直徑為105~110nm。病毒粒子的最外層是病毒囊膜,它是由宿主細胞衍生而來的脂質雙層結構。囊膜表面有長約8~10nm呈放射狀排列的纖突。
偽狂犬病毒是皰疹病毒科中抵抗力較強的一種。在37℃下的半衰期為7h,8℃可存活46天,而在25℃乾草、樹枝、食物上可存活10~30天,但短期保存病毒時,4℃較-15℃和-20℃凍結保存更好。病毒在pH4~9之間保持穩定。5%石炭酸經2min滅活,但0.5%石炭酸處理32天后仍具有感染性。0.5%~1%氫氧化鈉迅速使其滅活。對乙醚、氯仿等脂溶劑以及福馬林和紫外線照射敏感。
偽狂犬病毒V只有一個血清型,但不同毒株在毒力和生物學特徵等方面存在差異。偽狂犬病毒具有泛嗜性,能在多種組織培養細胞內增殖,其中以兔腎和豬腎細胞(包括原I代細胞和傳代細胞系)最為敏感,並引起明顯的細胞病變,細胞腫脹變圓,開始呈散在的灶狀,隨後逐漸擴展,直至全部細胞圓縮脫落,同時有大量多核巨細胞形成。細胞病變出現快,當病毒接種量大時,在18~24h後即能看到典型的細胞病變。
實驗動物也可用於病毒的分離。在兔、1日齡小鼠和組織培養之間對偽狂犬病毒的敏感性無顯著差異,但成年鼠與新生鼠相比有較強的抵抗力。雖然雞胚對偽狂犬病毒不很敏感,但套用雞胚絨毛尿囊膜接種是最早用於病毒增殖和傳代的方法。
偽狂犬病毒基因組是線狀雙鏈DNA分子,大小約150kb,平均G+C含量高達74%,具有典型的皰疹病毒基因組結構特徵,由獨特長區段、獨特短區段及位於US兩側的末端重複序列(TR)和內部重複序列(IR)組成。
流行病學
偽狂犬病毒在全世界廣泛分布。偽狂犬病自然發生於豬、牛、綿羊、犬和貓,另外,多種野生動物、肉食動物也易感。水貂、雪貂因飼餵含偽狂犬病毒的豬下腳料也可引起偽狂犬病的暴發。實驗動物中家兔最為敏感,小鼠、大鼠、豚鼠等也能感染。關於人感染偽狂犬病毒的報導很少,並且都不是以病毒分離為報導依據。如土耳其及我國台灣曾報導有血清學反應陽性者。歐洲也曾報告數例因皮膚傷口接觸病料組織而感染,主要表現為局部有發癢,未曾報告有死亡。最新的報導見於1992年,在波蘭因直接接觸偽狂犬病毒而感染的工人,首先是手部先出現短暫的瘙癢,後擴展至背部和肩部。
豬是偽狂犬病毒的貯存宿主,病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為本病重要傳染源。不少學者認為,其他動物感染本病與接觸豬、鼠有關。
在豬場,偽狂犬病毒主要通過已感染豬排毒而傳給健康豬,另外,被偽狂犬病毒污染的工作人員和器具在傳播中起著重要的作用。而空氣傳播則是偽狂犬病毒擴散的最主要途徑,但到底能傳播多遠還不清楚。人們還發現在鄰近有偽狂犬病發生的豬場周圍放牧的牛群也能發病,在這種情況下,空氣傳播是惟一可能的途徑。在豬群中,病毒主要通過鼻分泌物傳播,另外,乳汁和精液也是可能的傳播方式。
除豬以外的其他動物感染偽狂犬病毒後,其結果都是死亡。豬發生偽狂犬病後,其臨診症狀因日齡而異,成年豬一般呈隱性感染,懷孕母豬可導致流產、死胎、木乃伊胎和種豬不育等綜合症候群。15日齡以內的仔豬發病死亡率可達100%,斷奶仔豬發病率可達40%,死亡率20%左右;對成年肥豬可引起生長停滯、增重緩慢等。
偽狂犬病的發生具有一定的季節性,多發生在寒冷的季節,但其他季節也有發生。
臨床症狀
偽狂犬病毒的臨診表現主要取決於感染病毒的毒力和感染量,以及感染豬的年齡。其中,感染豬的年齡是最主要的。與其他動物的皰疹病毒一樣,幼齡豬感染偽狂犬病毒後病情最重。
新生仔豬感染偽狂犬病毒會引起大量死亡,臨診上新生仔豬第1天表現正常,從第2天開始發病,3~5天內是死亡高峰期,有的整窩死光。同時,發病仔豬表現出明顯的神經症狀、昏睡、嗚叫、嘔吐、拉稀,一旦發病,1~2日內死亡。剖檢主要是腎臟布滿針尖樣出血點,有時見到肺水腫、腦膜表面充血、出血。15日齡以內的仔豬感染本病者,病情極嚴重,發病死亡率可達100%。仔豬突然發病,體溫上升達41℃以上,精神極度委頓,發抖,運動不協調,痙攣,嘔吐,腹瀉,極少康復。斷奶仔豬感染偽狂犬病毒,發病率在20%~40%左右,死亡率在10%~20%左右,主要表現為神經症狀、拉稀、嘔吐等。成年豬一般為隱性感染,若有症狀也很輕微,易於恢復。主要表現為發熱、精神沉鬱,有些病豬嘔吐、咳嗽,一般於4~8天內完全恢復。懷孕母豬可發生流產、產木乃伊胎兒或死胎,其中以死胎為主無論是頭胎母豬還是經產母豬都發病,而且沒有嚴格的季節性,但以寒冷季節即冬末春初多發。
偽狂犬病的另一發病特點是表現為種豬不育症。近幾年發現有的豬場春季暴發偽狂犬病,出現死胎或斷奶仔豬患偽狂犬病後,緊接著下半年母豬配不上種,返情率高達90%,有反覆配種數次都屢配不上的。此外,公豬感染偽狂犬病毒後,表現出睪丸腫脹、萎縮,喪失種用能力。
病理變化
偽狂犬病毒感染一般無特徵性病變。眼觀主要見腎臟有針尖狀出血點,其他肉眼病變不明顯。可見不同程度的卡他性胃炎和腸炎,中樞神經系統症狀明顯時,腦膜明顯充血,腦脊髓液量過多,肝、脾等實質臟器常可見灰白色壞死病灶,肺充血、水腫和壞死點。子宮內感染後可發展為溶解壞死性胎盤炎。
組織學病變主要是中樞神經系統的彌散性非化膿性腦膜腦炎及神經節炎,有明顯的血管套及彌散性局部膠質細胞壞死。在腦神經細胞內、鼻咽黏膜、脾及淋巴結的淋巴細胞內可見核內嗜酸性包涵體和出血性炎症。有時可見肝臟小葉周邊出現凝固性壞死。肺泡隔核小葉質增寬,淋巴細胞、單核細胞浸潤。
診斷鑑別
根據疾病的臨診症狀,結合流行病學,可做出初步診斷,確診必須進行實驗室檢查。同時要注意與豬細小病毒、流行性乙型腦炎病毒、豬繁殖與呼吸綜合徵病毒、豬瘟病毒、弓形蟲及布魯氏菌等引起的母豬繁殖障礙相區別。
分離
1.病毒分離鑑定病毒的分離是診斷偽狂犬病的可靠方法。患病動物的多種病料組織如腦、心、肝、脾、肺、腎、扁桃體等均可用於病毒的分離,但以腦組織和扁桃體最為理想,另外,鼻咽分泌物也可用於病毒的分離。病料處理後可直接接種敏感細胞,如豬腎傳代細胞(PK-15和IBRS-2)、倉鼠腎傳代細胞 (BHK-21)或雞胚成纖維細胞(CEF),在接種後24~72小時內可出現典型的細胞病變。若初次接種無細胞病變,可盲傳3代。不具備細胞培養條件時,可將處理的病料接種家兔或小鼠,根據家兔或小鼠的臨診表現做出判定,但小鼠不如家兔敏感。分離到病毒後再用標準陽性血清做中和試驗以確診本病。
切片
2.組織切片螢光抗體檢測取患病動物的病料如腦或扁桃體的壓片或冰凍切片,用直接免疫螢光檢查。其優點是快速,在幾小時內即可獲得可靠結果,對於新生仔豬,其敏感性與病毒分離相當,但對於育肥豬與成年豬,該法則不如病毒分離敏感。
PCR
3.PCR檢測豬偽狂犬病病毒利用PCR可從患病動物的分泌物如鼻咽拭子或組織病料中擴增豬偽狂犬病病毒的基因,從而對患病動物進行確診。PCR與病毒分離鑑定相比,具有快速、敏感、特異性強等優點,能同時檢測大批量的樣品,並且能進行活體檢測,適合於臨診診斷。
血清學
4.血清學診斷多種血清學方法可用於偽狂犬病的診斷,套用最廣泛的有中和試驗、酶聯免疫吸附試驗、乳膠凝集試驗、補體結合試驗及間接免疫螢光等。其中血清中和試驗的特異性、敏感性都是最好的,並且被世界動物衛生組織(OIE)列為法定的診斷方法。但由於中和試驗的技術條件要求高、時間長,所以主要是用於實驗室研究。酶聯免疫吸附試驗同樣具有特異性強、敏感性高的特點,3~4h內可得出試驗結果,並可同時檢測大批量樣品,廣泛用於偽狂犬病的臨診診斷。另外,近幾年來,乳膠凝集試驗以其獨特的優點也在臨診上廣泛套用,操作極其簡便,幾分鐘之內便可得出試驗結果。
鑑別
5.鑑別診斷豬偽狂犬病病毒鑑別診斷方法是在使用基因標誌疫苗的基礎上套用的一類診斷方法。由於PRV中存在多個非必需糖蛋白基因,缺失這些基因的病毒突變株不能產生被缺失基因所編碼的糖蛋白,但又不影響病毒在細胞上的增殖與免疫原性。將這種基因缺失標誌疫苗注射動物後,動物不能產生針對缺失蛋白的抗體。因此,可通過血清學方法將自然感染野毒的血清學陽性豬與注苗豬區分開來。目前,缺失疫苗缺失的糖蛋白基因主要為gE和gG基因,也有缺失gC、gB基因的。針對缺失的糖蛋白已利用大腸桿菌或酵母等表達系統的表達產物建立了相應的鑑別診斷方法:gE-ELISA、gG-ELISA、gC-ELISA、gB-ELISA以及 gE-LAT、gG、LAT等,實驗證實這些方法的特異性強、敏感性高,可用於臨診檢測,同時乳膠凝集還具有簡單、快速的特點。目前,在我國已有gE-ELISA、gG-ELISA和gE-LAT、gG-LAT問世。
防治措施
預防:
疫苗免疫接種是預防和控制偽狂犬病的根本措施,以淨化豬群為主要手段,首先從種豬群淨化,實行‘小產房’、‘小保育’、‘低密度’、‘分階段飼養 ’的飼養模式。加強豬群的日常管理。
1、免疫接種:
(1)後備豬應在配種前實施至少2次偽狂犬疫苗的免疫接種,2次均可使用基因缺失弱毒苗。
(2)經產母豬應根據本場感染程度在懷孕後期(產前20-40天或配種後75-95天)實行1-2次免疫。母豬免疫使用滅活苗或基因缺失弱毒苗均可,2次免疫中至少有1次使用基因缺失弱毒苗,產前20-40天實行2次免疫的妊娠母豬,第一次使用基因缺失弱毒苗,第二次使用蜂膠滅活苗較為穩妥。
(3)哺乳仔豬免疫根據本場豬群感染情況而定。本場未發生過或周圍也未發生過偽狂犬疫情的豬群,可在30天以後免疫1頭份滅活苗;若本場或周圍發生過疫情的豬群應在19日齡或23-25日齡接種基因缺失弱毒苗1頭份;頻繁發生的豬群應在仔豬3日齡用基因缺失弱毒苗滴鼻。
(4)疫區或疫情嚴重的豬場:保育和育肥豬群應在首免3周后加強免疫1次。
消滅牧場中的鼠類,對預防本病有重要意義。同時,還要嚴格控制犬、貓、鳥類和其他禽類進入豬場,嚴格控制人員來往,並做好消毒工作及血清學監測等,這樣對本病的防制也可起到積極的推動作用。此外,對豬群採血做血清中和試驗,陽性者隔離,以後淘汰。以3~4周為間隔反覆進行,一直到兩次試驗全部陰性為止。另外一種方式是培育健康豬,母豬產仔斷乳後,儘快分開,隔離飼養,每窩小豬均須與其他窩小豬隔離飼養。到16周齡時,做血清學檢查(此時母源抗體轉為陰性),所有陽性豬淘汰,30日後再做血清學檢查,把陰性豬合成較大群,最終建立新的無病豬群。
治療:
本病沒有有效的治療措施,前期只要靠預防為主。如果發病可以使用豬血清抗體進行治療。
豬場淨化技術要點
1、保證各個階段豬只的合理營養供給。
2、做好清潔、消毒工作。及時清理糞便,避免產生過多有害氣體污染環境。
3、做好密度、通風、冬天保溫及夏天降溫管理。夏天母豬舍和公豬舍都採取水簾式降溫和排風扇抽風抽濕的方法,讓豬只處於舒適的環境。
4、全進全出及同日齡階段飼養。全進全出在疾病控制上起著很重要的作用,所以我們要求全進全出一定要徹底,包括豬群、工作人員、工具等。
5、每個環節設一個專用的病豬隔離場所,及時把病豬隔離出來,這無論是對病豬的病情控制和對未感染豬群都是很好的。
6、消滅可能的傳播媒介。豬場嚴格禁止飼養犬、貓及家禽,杜絕犬、貓、雞及其他鳥類進入豬場,定期進行場內滅鼠、滅蠅工作。
7、對全場種豬(含公母種豬及後備豬群)進行臨床觀察及生產繁殖性能的調查。
8、合理地使用疫苗,並根據抗體水平決定免疫程式。