複製起始位點的引發(Priming)階段包括DNA複製起始位點起點雙鏈解開，通過轉錄激活步驟合成RNA分子，RNA引物的合成，DNA聚合酶將第一個脫氧核苷酸加到引物RNA的3'-OH末端複製起始位點引發的關鍵步驟就是前導鏈DNA的合成，一旦前導鏈DNA的聚合作用開始，滯後鏈上的DNA合成也隨著開始，在所有前導鏈開始聚合之前有一必需的步驟就是由RNA聚合酶(不是引物酶)沿滯後鏈模板轉錄一短的RNA分子。在有些DNA複製起始位點中，(如質粒ColE)，該RNA分子經過加式成為DNA複製起始位點的引物。但是，在大部分DNA複製起始位點中，該RNA分子沒有引物作用。它的作用似乎只是分開兩條DNA鏈，暴露出某些特定序列以便引發體與之結合，在前導鏈模板DNA上開始合成RNA引物，這個過程稱為轉錄激活(transcriptional activation)，在前導鏈的複製起始位點引發過程中還需要其他一些蛋白質，如大腸桿菌的dnaA蛋白。這兩種蛋白質可以和複製起始位點起點處DNA上高度保守的4個9bp長的序列結合，其具體功能尚不清楚。可能是這些蛋白質與DNA複製起始位點起點結合後能促進DNA聚合酶Ⅲ複合體的七種蛋白質在複製起始位點起點處裝配成有功能的全酶。DNA複製起始位點開始時，DNA螺鏇酶首先在複製起始位點起點處將雙鏈DNA解開，通過轉錄激活合成的RNA分子也起分離兩條DNA鏈的作用，然後單鏈DNA結合蛋白質結合在被解開的鏈上。由複製起始位點因子X(n蛋白)，複製起始位點因子Y(n'蛋白)，n"蛋白，i蛋白，dnaB蛋白和dnaC蛋白等6種蛋白質組成的引發前體(preprimosome)，在單鏈DNA結合蛋白的作用下與單鏈DNA結合生成中間物，這是一種前引發過程。引發前體進一步與引物酶(primase)組裝成引發體(primosome)。引發體可以在單鏈DNA上移動，在dnaB亞基的作用下識別DNA複製起始位點起點位置。首先在前導鏈上由引物酶催化合成一段RNA引物，然後，引發體在滯後鏈上沿5'→3'方向不停的移動(這是一種相對移動，也可能是滯後鏈模板在移動，見後)，在一定距離上反覆合成RNA引物供DNA聚合酶Ⅲ合成岡崎片段使用，引發體中許多蛋白因子的功能尚不清楚。但是，這些成份必須協同工作才能使引發體在滯後鏈上移動，識別合適的引物合成位置，並將核苷酸在引發位置上聚合成RNA引物。由於引發體在滯後鏈模板上的移動方向與其合成引物的方向相反，所以在滯後鏈上所合成的RNA引物非常短，一般只有3-5個核苷酸長。而且，在同一種生物體細胞中這些引物都具有相似的序列，表明引物酶要在DNA滯後鏈模板上比較特定的位置(序列)上才能合成RNA引物。
為什麼需要有RNA引物來引發DNA複製起始位點呢?這可能儘量減少DNA複製起始位點起始處的突變有關。DNA複製起始位點開始處的幾個核苷酸最容易出現差錯，因此，用RNA引物即使出現差錯最後也要被DNA聚合酶Ⅰ切除，提高了DNA複製起始位點的準確性。RNA引物形成後，由DNA聚合酶Ⅲ催化將第一個脫氧核苷酸按鹼基互補原則加在RNA引物3'-OH端而進入DNA鏈的延伸階段。
