概述
層析柱中的填充物或稱支持劑都是一些具有親水性的不溶物質，如纖維素、澱粉、矽膠等。支持劑吸附著一層不會流動的結合水，可以看作為固定相，沿固定相流過的與它不互濟的溶劑(如苯酚、正-丁醇等)是流動相。由填充料構成的柱床可以構想為由無數的連續板層組成，每一板層起著微觀的“分溶管”作用。當用洗脫劑(eIuent)洗脫時，即流動相移動時，加在柱上端的胺基酸混合物樣品在兩相之間將發生連續分配，混合物中具有不同分配係數的各種成分沿柱以不同的速度向下移動。分部收集柱下端的洗出液。收集的組分分別用布三酮顯色定量。以胺基酸量對洗出液體積作圖，得洗脫曲線。曲線中的每個峰相當於某一種胺基酸。
操作步驟
（一）裝柱
裝柱前，將固定相與載體混合，如果用矽膠、纖維素等載體時，可以直加固定相直接混合，用硅藻土為載體先把硅藻土放在大量流動相液體中，在不斷攪拌下，逐漸加入固定相。裝柱也分乾法和濕法兩種。應注意的是，因為分配柱層析法使用兩種溶劑，所以事先必須先使這兩個相互相飽和，即將兩相溶劑放在一起振搖，待分層後再分別取出套用。至少流動相應先用固定相飽和後再使用；否則，在以後洗脫時當通過大量的流動相時，就會把載體中的固定相逐漸溶掉，最後只剩下載體，就不能成為分配層析。
反相分配柱層析中多用纖維素粉末為支持劑，與固定相混合按一般方法操作。
（二）加樣
1、將被分離物配成濃溶液，用吸管輕輕沿管壁加到含固定相載體的上端，然後加流動相洗脫；
2、被分離物溶液用少量含固定相的載體吸收，溶劑揮發後，加在層析管載體的上端，然後加流動相洗脫；
3、用一塊比管徑略小的圓形濾紙吸附被分離物溶液，溶劑揮發後，放在載體上，然後加流動相洗脫。
