化合物簡介
基本信息
中文名稱：胰激肽原酶
中文別名：舒血管素、保妥汀、胰激肽釋放酶、血管舒緩素、激肽釋放酶、依可佳、怡開
英文名稱：Pancreatic Kininogenase
英文別名：TPK、Kallidinogenase、Pancreate Kallikrein、Padutin、Kallikrein
分子量：26800
物理性質
外觀與性狀：白色或類白色粉末。
氣味：無臭。
溶解度：在水中易溶，在乙醇或乙醚中幾乎不溶。
化學性質
激肽釋放酶是從豬的顎下腺或胰臟中提取的一種有舒張血管作用的物質。為白色或灰白色粉末；易溶於水（10%）、稀醇，不溶於濃乙醇和一般有機溶劑。溶於水或生理鹽水後成無色或微黃色的澄明溶液。Ph4.5～7.8時較穩定。對熱、強酸、強鹼、氧化劑均不穩定。等電點為3.9～4.37。
一般說來，純度越高，穩定性越差。乾燥粉末在-20保存數月活性不變。在Ph=8的水及緩衝液中，冷凍保存可持續相當長時間不失活。重金屬離子Hg2+、Ca2+、Mn2+、Ni2+、等對它有同程度的抑制作用（Ca2+、Mg2+對酶活性無影響），巰其化合物及螯合劑EDTA等可逆轉金屬離子對它的抑制。相反高濃度Ca2+(1molL^·{-1可使酶活性增加15% ～20%。某此胰蛋白酶抑制劑如抑肽酶，二異丙基磷酸等對胰及頜下腺激肽釋放酶均有抑制作用。
生產方法
方法一
豬頜下腺為原料提取取新鮮或冷凍的豬頜下腺，洗淨，除去脂肪等物，在絞肉機中絞碎。每100kg豬頜下腺漿加5倍水攪拌提取，用乙酸調Ph至4.5，加入600ml二甲苯防腐。提取12h後補加二甲苯600ml，用乙酸調節Ph值保持為4.5，繼續提取12h，除掉上層懸浮脂肪，紗布過濾，再用尼龍布濾清，得提取液。
豬頜下腺HO;HAc;二甲苯；Ph4.5→提取提取液
吸附在不斷攪拌下將提取液中加入事先用提取液調成漿的藥用氫氧化鋁乾凝膠3.4kg，繼續攪拌1h，再加入氫氧化鋁乾凝膠1.6kg，攪拌2h，靜置過夜。虹吸棄去上層液，加入5倍於漿重的水攪拌洗滌，靜置，虹吸棄去上層液。如此重複洗滌5～6次，直到上層液基本澄清為止。即得吸附漿。
洗脫稱取吸附漿重量，按含水量（氫氧化鋁漿重減去氫氧化鋁重）的13.2g/L(1.32%)加入磷酸氫二銨，用氨水（8.6%）調節Ph為8.4，邊攪拌邊洗脫2h，在洗脫初期Ph出現降低，可隨時用氨水（8.6%）調整Ph至保持8.4。再加入按含水量的10g/L（1%）氯化鈉，繼續攪拌10min，然後在每100ml的洗脫液的洗脫液中加入純度為92%以上的乙醇49～50ml，靜置過夜，次日經紙漿過濾，收集濾液。
沉澱、乾燥濾液用乙酸（2mol/L）調Ph至6.7，在攪拌下，第100ml濾液中加入純度92%以上的乙醇80ml。靜置，待沉澱完全後，虹吸棄去上清液，離心，分離沉澱，沉澱用丙酮洗滌脫水，真空乾燥，得粗品。
洗脫液→沉澱；乾燥粗製品
精製將粗品用25倍量的乙酸銨溶液（10%）溶解，使Ph至6.5～6.7,加入與該溶液等量的乙醇（95%）攪勻，冷藏，靜置過夜。次日過濾，每升濾液中加入藥用活性炭80g（8%），攪拌15min，過濾，濾液加3倍量的乙醇（95%），冷藏靜置，離心，分離沉澱，沉澱物用丙酮先滌，脫水，真空乾燥，得精製品。總收率是4500U/kg（對新鮮頜下腺計）。粗製品→純化；去雜蛋白清液
方法二
以豬胰為原料提取、沉澱鍺胰製成丙酮粉後，加入乙酸（0.02mol/L）約豬胰丙酮粉量的20倍，在10C下，不斷攪拌，提取12h，提取完畢後，離心，濾渣加10倍量乙醇（0.02mol/L）繼續提取6h，合併兩次濾液，在每100ml加冷丙酮33ml（體積分數為33%），過濾。濾液補加冷丙酮至體積分數為70%，靜置4h，離心，分離沉澱物，用丙酮、乙醚脫脂脫水，真空乾燥，得沉澱物。
分級沉澱在沉澱物加入50倍沉澱物量的冷氯化鈉（2g/L即0.2%）,用氨水調pH為8，攪拌溶解，待溶解完全後，紙漿過濾，得清澈的濾液，將濾液冷卻至2～3C,在每100ml濾液中加入冷丙酮40ml，使體積分數達40%，低溫冷藏，過夜。離心，分離上清液補加冷丙酮至體積分數為60%，靜置4h，低溫冷藏，沉澱用丙酮、乙醚洗滌，真空乾燥，即得粗製品。
吸附、洗脫、透析、凍乾取粗製品溶於一定量的pH4.5乙酸緩衝液（0.001mol/L）中，離心，分離上清液，上清液加入弱酸性陽離子交換樹脂AmheriteCG-50,m(樹脂)：m（粗製品）=50：1，在攪拌下，使之吸附2h，收集樹脂，用pH4.5乙酸緩衝液（0.001mol/L）漂洗樹脂直至無泡沫。用2倍量pH5的氯化鈉（1mol/L）溶液攪拌洗脫樹脂1h，分離樹脂，洗脫液透析脫鹽，冷凍乾燥，即得精緻品胰激肽釋放酶。
藥典標準
製法要求
本品應從檢疫合格的豬胰中提取，生產過程應符合現行版《藥品生產質量管理規範》的要求。供注射用的本品在生產過程中應採用適宜的病毒滅活工藝。
鑑別
（1）取已測得效價的本品適量，精密稱定，加純度項下的磷酸鹽緩衝液溶解並定量稀釋製成每1ml中含10單位的溶液。精密量取4ml，置10ml量瓶中，用上述緩衝液稀釋至刻度，作為供試品溶液。
取效價測定項下的底物溶液2.9ml，在30℃±0.5℃預熱5分鐘，置1cm比色池中，精密加入供試品溶液0.1ml，混勻，立即計時，使比色池內的溫度保持在30℃±0.5℃，照紫外－可見分光光度法，在253nm的波長處測定，以純度項下的磷酸鹽緩衝液0.1ml代替供試品溶液，同法操作，作為空白對照。準確讀取4分鐘時的吸光度（A4）和6分鐘時的吸光度（A6）。求得A值[（A6-A4）/2]，按下式計算，R值（水解速率）應為0.12～0.17。
胰激肽原酶式中a為供試品溶液每1ml中的毫克數；
b為供試品每1mg的效價單位數。
（2）在純度檢查項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。
檢查
1.酸鹼度
取本品適量，加水溶解並製成每1ml中含300單位的溶液，依法測定，pH值應為5.5～7.5。
2. 溶液的澄清度
取本品適量，加水溶解並製成每1ml中含2mg的溶液，依法檢查，溶液應澄清（供注射用）。
3.脂肪
取本品1.0g，置具塞錐形瓶中，加乙醚20ml，密塞，時時鏇動，放置約30分鐘後，將乙醚液傾至用乙醚潤濕的濾紙上，濾過，再用乙醚10ml洗滌殘渣，合併濾液及洗液至已恆重的蒸發皿中，除去乙醚，在105℃乾燥2小時，精密稱定，遺留脂肪不得過5mg。
4. 相關蛋白酶
4.1 供試品溶液的製備
取本品適量，加上述磷酸鹽緩衝液（pH 7.0）溶解並稀釋製成每1ml中含1單位的溶液。
4.2測定法
精密量取供試品溶液1ml置試管中，在35℃±0.5℃水浴中保溫5分鐘，精密加入已預熱至35℃±0.5℃的酪蛋白溶液（酪蛋白0.6g，加0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液80ml，65℃加熱溶解，放冷，調節pH值至8.0，用水稀釋至100ml，臨用前配製）5ml，混勻，於35℃±0.5℃水浴中準確反應20分鐘，再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，混勻，濾過，取續濾液作為測定溶液；另精密量取供試品溶液1ml，置試管中，精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，混勻，於35℃±0.5℃水浴中準確反應20分鐘，再精密加入上述酪蛋白溶液5ml，混勻，濾過，取續濾液作為空白溶液，在2小時內照紫外－可見分光光度法，在280nm的波長處測定吸光度，不得過0.2。
5. 乾燥失重
取本品0.5g，以五氧化二磷為乾燥劑，在60℃減壓乾燥4小時，減失重量不得過5.0%。
6. 熾灼殘渣
取本品0.5g，依法檢查，遺留殘渣不得過3.0%。
7. 純度
取本品適量，用流動相A溶解並製成每1ml中約含200單位的溶液，作為供試品溶液。另取胰激肽原酶對照品（純度應大於95%）適量，同法製成每1ml中約含200單位的溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法試驗。用疏水性凝膠為填充劑（如TSKgel Phenyl-5PW，7.5mm×75mm，10μm）；以含1.7mol/L硫酸銨的磷酸鹽緩衝液（pH 7.0）（取磷酸氫二鈉10.9g，磷酸二氫鈉2.3g，加水溶解並稀釋至1000ml，用50%磷酸溶液調節pH值至7.0）為流動相A，以上述磷酸鹽緩衝液（pH 7.0）為流動相B;柱溫為25℃；流速為每分鐘0.5ml;檢測波長為280nm。按下表進行梯度洗脫。理論板數按胰激肽原酶峰計算應不低於1500，胰激肽原酶主峰與相鄰雜質峰的分離度不得低於0.8。分別取流動相A、供試品溶液及對照品溶液各20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。將供試品溶液和對照品溶液的色譜圖扣除流動相A色譜圖（作為空白基線），進行基線校正。在供試品溶液色譜圖中，取空白基線拐點（約16分鐘）後所有色譜峰，按面積歸一化法計算，與對照品溶液主峰保留時間一致的主峰面積不得低予75%（供口服用）或90%（供注射用）。
| 時間（分鐘） | 流動相A（%） | 流動相B（%） |
| 0 | 100 | 0 |
| 10 | 100 | 0 |
| 20 | 0 | 100 |
| 35 | 0 | 100 |
| 36 | 100 | 0 |
| 56 | 100 | 0 |
8．細菌內毒素
取本品，依法檢查，每1單位胰激肽原酶中含內毒素的量應小於2.5EU（供注射用）。
效價測定
1. 酶活力
1.1標準品溶液的製備
取胰激肽原酶標準品，按標示單位，用上述磷酸鹽緩衝液（pH 7.0）溶解並稀釋製成每1ml中含10單位的溶液。
1.2 供試品溶液的製備
取本品適量，精密稱定，用上述磷酸鹽緩衝液（pH 7.0）溶解並定量稀釋製成每1ml中約含10單位的溶液。
1.3底物溶液的製備
取N-苯甲醯-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽17.7mg，加入三羥甲基氨基甲烷緩衝液（稱取三羥甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml溶解，用6mal/L鹽酸溶液調節pH值至8.0，用水稀釋至1000ml）至100ml，4℃保存。
1.4 測定法
量取25℃±0.5℃水浴中預熱的底物溶液2.5ml，置1cm比色池中，分別精密加入供試品溶液或標準品溶液0.1ml，混勻，立即計時，使比色池內的溫度保持在25℃±0.5℃，照紫外－可見分光光度法（2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），於253nm波長處，以底物溶液為空白，準確讀取1分鐘時的吸光度A。和3分鐘時的吸光度A，標準品溶液和供試品溶液需平行測定3次，分別求得標準品溶液和供試品溶液的△A值（△A=A-A0）的平均值，代入下式計算：
胰激肽原酶2. 蛋白含量
取本品約10mg，精密稱定，照蛋白質含量測定法測定，即得。
3. 比活
由測得的酶活力和蛋白含量計算每1mg蛋白中含胰激肽原酶的單位數。
藥理作用
其作用機制為：1.降解激肽原，生成激肽，從而擴張小血管和毛細血管、改善血管通透性及血流量。2.通過緩激肽和組胺多肽對血栓烷B2(TXB2)的負反饋，促使血管內皮細胞產生PGI2，從而抑制血小板效應以防止凝血。3.激活纖溶酶原轉變為纖溶酶，以提高纖溶活性，降低血漿中纖維蛋白含量，有利於防止血栓形成。4.本藥還可降低腎血管阻力、心肌耗氧量及減少心肌細胞缺氧缺糖性損傷，從而起到增強心肌收縮力、改善心功能和增加血流量的作用。
藥代動力學
健康成年人口服3片(56U)後，用酶免疫法測定其達峰時間為4h，t1/2為7h左右。用Ⅰ標記的胰激肽釋放酶經小白鼠十二指腸給藥，測定其在動物體內的吸收、分布、代謝情況，結果表明：藥物在腸管壁吸收，給藥24h後，肝、腎臟器的分布濃度達最高峰，測得尿中的濃度比血漿高出2倍，提示本品通過腎臟排泄。
適應症
可用於多種心、腦血管病變，如原發性高血壓、動脈硬化、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、腦動脈硬化、腦血栓、視網膜供血障礙以及周圍血管病變等。近來研究發現，本品可用於防止糖尿病微血管病變及早期糖尿病性腎病(有較好的治療效果，可減少尿清蛋白的排出量)。國外有臨床資料提示，本品可增加精子的活性及生成數量，對治療某些男性不育症有一定的療效。
用法用量
成人常規劑量：
口服給藥：腸溶片：一次120～240U，一日360～720U，空腹服用。
皮下注射：一次10～20U，一日l～2次，3周為一療程。
肌內注射：一日10～40U，一日1次或隔日1次。臨用前，加滅菌注射用水1.5ml溶解。
結膜下注射：一次5U。
1.口服給藥：腸溶片：一次120～240U，一日360～720U，空腹服用。
2.皮下注射：一次10～20U，一日l～2次，3周為一療程。
3.肌內注射：一日10～40U，一日1次或隔日1次。臨用前，加滅菌注射用水1.5ml溶解。
4.結膜下注射：一次5U。
不良反應
是從豬胰腺中提取的蛋白水解酶，為一種內源性藥物，不良反應甚少。用藥期間偶見頭昏、乏力等反應。極個別患者可出現皮疹，對症處理後消失。
注意事項
1. 本藥不能與蛋白酶抑制藥同時使用。
2. 慎用：(1)近期腦血管意外患者。(2)腦出血或有其他出血傾向患者。
3. 藥物對妊娠的影響：尚不明確。
4. 藥物對哺乳的影響：尚不明確。
5. 貯法：密閉，在陰涼乾燥處保存。
禁忌症
對本藥過敏者。
腫瘤患者。
顱內壓增高者。
心力衰竭者。
急性心肌梗死者。
.急性出血患者。
1.對本藥過敏者。
2.腫瘤患者。
3.顱內壓增高者。
4.心力衰竭者。
5.急性心肌梗死者。
6..急性出血患者。
藥物相互作用
與蛋白酶抑制劑不能同時使用。
與血管緊張素轉換酶抑制劑合用時有協同作用。
1.與蛋白酶抑制劑不能同時使用。
2.與血管緊張素轉換酶抑制劑合用時有協同作用。
劑型與規格
CFDA網站上胰激肽原酶有注射劑：10U、20 U、40 U；注射劑(凍乾粉針劑)： 10 U、40 U；片劑均為腸溶片，規格為60 U、120 U、240 U。
