培養方法
1.標本採集
採集標本時,除糞便、咽拭子、痰等標本外,其他樣本均應以嚴格無菌技術採集。採集時間宜於病程的急性期、早期、症狀典型期或用藥前。採集量不宜太少,標本盛於無菌容器內。標本運送應避免接觸空氣,必要時床邊接種。
2.培養方法
(1)厭氧缸法:將接種標本的平板或液體培養基試管放入厭氧缸內培養,厭氧缸是普通的乾燥缸,用物理化學方法除去缸內氧氣,造成無氧環境,以利於專性厭氧菌生長。常用的方法有抽氣換氣法和氣體發生袋法。
(2)厭氧袋法:即在無毒、透明不透氣的塑膠袋內造成無氧環境培養厭氧菌。塑膠袋內裝入氣體發生管、美藍指示劑管、鈀催化劑管、乾燥劑。放入已接種細菌的平板後,儘量擠出袋內空氣,然後密封袋口。先折斷氣體發生管,後折斷美藍指示劑管,若美藍無色表示袋內已達無氧狀態,可置於35℃培養箱內孵育。
(3)厭氧手套箱:是公認的培養厭氧菌的最佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱,箱前面有一個有機玻璃透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作。這種厭氧箱適於培養基還原、厭氧菌標本接種、分離培養、生化鑑定和體外藥敏試驗等厭氧菌培養的全套操作。
(4)焦性沒食子酸法:在一潔淨的玻片上鋪上紗布或濾紙,均勻撒上焦性沒食子酸,然後再混入碳酸氫鈉粉末或滴入氫氧化鈉溶液,迅速將已接種細菌的平板倒扣在上面,用融化的石蠟封邊,造成一個封閉空間。焦性沒食子酸與鹼反應後耗氧。該法用於厭氧不嚴格的厭氧菌的培養。
(5)皰肉培養基:皰肉和肉湯裝入大試管,液面封凡士林,造成無氧環境。
(6)黃磷法:在可密閉的玻璃容器底部裝水,上放一塊隔板,把接種細菌的培養皿用紙包裹,放在隔板上。在容器上部放一個敷有碳酸鈣的無菌平皿,將黃磷置於其中點燃,立即密閉容器,造成無氧環境。
正常參考值
培養陽性,結合臨床表現可診斷相應細菌感染。
臨床意義
厭氧菌感染常見於臟器膿腫、腹膜炎、膿性胸膜炎、蜂窩織炎、牙周炎、盆腔炎和闌尾炎。臨床已診斷的厭氧菌感染中,約80%是由擬桿菌屬、消化鏈球菌屬和梭菌屬這三大類厭氧菌引起,其中最常見的是脆弱擬桿菌、大消化鏈球菌和產氣莢膜梭菌。