真核細胞表達載體

真核細胞表達載體之一為pEGFP-N1載體，具有對方面的優點。pEGFP-N1載體上攜帶有EGFP蛋白表達基因，如上圖質粒圖譜所示。

pEGFP-N1載體具有以下幾方面特點：
①從結構上看，該質粒具有很強的複製能力，可以滿足隨宿主細胞分裂時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞，這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一；
②含有高效的功能強大的啟動子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的細胞中穩定表達；
③具有多克隆位點，便於目的基因的插入；
④該載體具有neo基因，可以採用G418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。
這些特殊的結構可以實現目的基因在靶細胞內的穩定表達。
GFP的相關知識：
綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)基因來源於Jellyfish Aequorea Victoria， 是Shimomura等於1962年發現的蛋白質，由238個胺基酸組成，分子量約為27Kd。GFPGFP在包括熱、極端PH和化學變性劑等苛刻條件下都很穩定，用甲醛固定後會持續發出螢光，但在還原環境下螢光會很快熄滅。
與以往常用的報告基因相比，GFP具有以下優點：
①在螢光顯微鏡下，用波長約490 nm的藍光激發後，即可觀察到綠色螢光，直接、簡捷、便於檢測；
②無需任何的作用底物或共作用物,檢測的靈敏度不受反應效率的影響，保證了極高的檢出率；
③蛋白本身性質穩定；
④可在多種異源生物中表達且無細胞毒性；
⑤其基因片段長度較小(約717 bp)，易於構建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持螢光激發活性，為研究其他基因表達產物的分布提供了方便。
EGFP是一種最佳化的突變型GFP，使其產生的螢光較普通GFP強35倍，大大增強了其報告基因的敏感度。EGFP與其他蛋白的融合表達已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，並不影響其發光。