概述
血紅蛋白測定常用的方法按原理大致分為4類：全血鐵法，比重法、折射儀法，血氣分析法，比色法。
臨床常用比色法，有HiCN測定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白測定法、鹼羥血紅蛋白測定法、疊氮高鐵血紅蛋白測定法、溴代十六烷基三甲胺血紅蛋白測定法等。
為統一Hb測定方法，1966年國際血液學標準化委員會（International Committee for Standardization in Haematology，ICSH）推薦HiCN測定法作為人血紅蛋白測定的標準方法。1978年，國際臨床化學聯合會和國際病理學會在聯合發布的國際性檔案中重申了HiCN法。
原理
氰化高鐵血紅蛋白測定法氰化高鐵血紅蛋白測定法原理：血紅蛋白（硫化血紅蛋白除外）中的亞鐵離子（Fe ）被高鐵氰化鉀氧化為高鐵離子（Fe ），血紅蛋白轉化為高鐵血紅蛋白（hemiglobin, Hi）。Hi與氰化鉀（KCN）中的氰離子反應生成HiCN。HiCN最大吸收波峰為540nm，波谷為504nm。在特定條件法，HiCN毫摩爾消光係數為44L/(mmol·cm)。HiCN在540nm處的吸光度與濃度成正比，根據測得的吸光度（A）可求得血紅蛋白的濃度。
氰化高鐵血紅蛋白測定法計算公式：Hb（g/L）=(g/L)
測定過程
手工測定方法（僅作參考）：
器具和試劑
採血工具，分光光度計，HiCN轉化液。
步驟
準備：打開分光光度計預熱（預熱時間由儀器類型決定），取5ml HiCN轉化液與試管中；
採血：一般為採用皮膚採血法，採血20μl後立即溶於含有轉化液的試管中，充分震盪混勻，靜置5分鐘；
測定：使用分光光度計測定混合液的吸光度A；
計算：根據公式計算血紅蛋白含量。
1.準備：打開分光光度計預熱（預熱時間由儀器類型決定），取5ml HiCN轉化液與試管中；
2.採血：一般為採用皮膚採血法，採血20μl後立即溶於含有轉化液的試管中，充分震盪混勻，靜置5分鐘；
3.測定：使用分光光度計測定混合液的吸光度A；
4.計算：根據公式計算血紅蛋白含量。
參考範圍
成年：男性120~160 g/L；女性110~150 g/L
新生兒：170~200 g/L
HiCN轉化液
| 轉化液 | 作用 | 評價 |
| 都氏 | ①KFe(CN)和KCN：使Hb形成穩定的HiCN | 反應速度慢，15℃時40分鐘才能使Hb完全轉化成HiCN |
| ②NaHCO：防止高球蛋白血液標本的溶血液產生渾濁 | ||
| 文-齊液 | ①KFe(CN)和KCN：使Hb形成穩定的HiCN | WHO和我國衛生部推薦使用 |
| ②非離子型表面活性劑：溶解紅細胞、游離Hb，防止溶血液渾濁；助溶劑 | ||
| ③磷酸二氫鉀：維持pH在7.2±0.2，防止高球蛋白血液標本渾濁 |
臨床意義
增多與減少的臨床意義基本與紅細胞的增多與減少相同;由於貧血類型不同，有時也不一致，此時紅細胞形態學改變有重要意義。由於本測定血紅蛋白較精確，紅細胞計算多有誤差，故在貧血分度上多依據血紅蛋白含量。
