原理
(1)在一個植物體內,病毒易於通過維管系統而移動,但在分生組織中不存在維管系統。病毒在細胞間移動只能通過胞間連絲,速度很慢,難以趕上活躍生長的莖尖;
(2)在旺盛分裂的分生細胞中,代謝活性高,競爭抑制了病毒的複製;
(3)在莖尖存在高水平內源生長素,也可能抑制病毒的增殖。
方法
(1)莖尖的剝離:此步是技術關鍵,一般在解剖鏡下操作。2-3cm的莖段,剝去大葉,水沖洗1h左右,酒精快速消毒,無菌條件下5%漂白粉溶液(或其他消毒劑)消毒7-10min,無菌水清洗,解剖鏡下剝取莖尖。
(2)切取莖尖的大小雖然切取莖尖越小,帶有病毒的可能性就越小,但組織培養中,切取的莖尖太小,則不易成活。不同種類的植物和不同病毒,切取的最適莖尖大小也不同。
(3)組織培養常用基本培養基是MS培養基或White培養基,它有較高濃度的無機鹽,對促進組織分化和愈傷組織生長有利;植物生長調節的種類和配比依培養種類和生長時期來調整。
提高效果關鍵
幾種方法的配合使用是提高植物脫毒效果的關鍵:
(1) 高溫熱處理與微莖尖脫毒培養技術
(2) 高溫熱處理與微(體)莖尖嫁接培養技術
(3) 化學處理與莖尖脫毒培養技術
(4) 愈傷組織熱處理與化學處理配合