核內小分子
細胞內有小核RNA(smallnuclearRNA,snRNA)。它是真核生物轉錄後加工過程中RNA剪接體(spilceosome)的主要成分。現在發現有五種snRNA,其長度在哺乳動物中約為100-215個核苷酸。snRNA一直存在於細胞核中,與40種左右的核內蛋白質共同組成RNA剪接體,在RNA轉錄後加工中起重要作用。
簡介
檸檬酸法分離大鼠肝細胞核,用14MNaCl-0.05MTris-HCl緩衝液(pH7.6)提取核漿,用2MNaCl-0.05MTris-HCl緩衝液(pH7.6)提取染色質,剩餘部分為核仁、核膜和核核心糖核蛋白網狀結構,用熱酚法提取三部分RNA,用地衣酚法分別測定三部分RNA的含量,用8%聚丙烯醯胺凝膠電泳分析其中核內小分子RNA,可以看出,核漿部分主要為4SRNA,核內小分子RNA主要分布在剩餘部分和染色質部分。
相關資料
由非編碼小分子RNA(siRNAs,miRNAs)誘導的RNA干涉作為基因功能研究、基因治療等新工具,目前已成為分子生物學的研究熱點。最近,一種新型小分子RNA-piRNAs在老鼠的生殖細胞中被發現,特異性地與Miwi蛋白結合,被認為是精子發育及合子形成過程中必不可少的。本文就piRNAs的發現、遺傳特性和可能的作用模式作一綜述,並闡述了研究意義和套用前景。
微小RNA(miRNA)是小分子RNA家族中的一員,內源性非編碼基因構成的21~23nt單鏈小RNA分子,在生物進化過程中保持了高度的保守性,通常由Dicer酶從具有髮夾二級結構的RNA前體加工而來,miRNA雖然微小,但它在真核生物發育和基因表達中通過與靶mRNA形成完全或不完全互補配對從而扮演著重要角色。2004年,發現了編碼和表達miRNA的第一個病毒——伊波拉病毒(epstein-barrvirus,EBV),最近,miRNA又從肉瘤相關皰疹病毒(kaposi’ssarcoma-as-sociatedherpesvirus,KSHV)和人巨細胞病毒(humancytomegalovirus,HCMV)中克隆到,此外,SV40miRNA被認為負調控T抗原(1argeT-antigen,TAg)表達,作者對病毒編碼的miRNA及miRNA在最近研究中的預測、表達和功能作一綜述。
利用改進的TRIZOL法首次從鵪鶉血液中提取小分子RNA,比較小分子RNA在組織與血液中的表達差異,為簡化小分子RNA的提取程式,提高實驗研究效率以及探討小分子RNA的遺傳特性提供可供借鑑的資料。結果發現:①改進Trizol法提取血液中的總RNA,效果顯著,條帶清晰;②發現血液中只存在一種小分子的miRNAs(18-22bp);③影響小分子RNA提取效率的關鍵因素包括樣本的新鮮程度和RNA酶的污染。研究結果表明,通過改進的Trizol法提取血液中小RNA方法是可行的,小分子RNA在家禽血液中的表達具有特異性,snoRNAs,piRNAs在血液中不表達。