抗纖溶酶(α2-Antiplasmin，α2-AP)是由肝臟合成分泌的，含有452胺基酸的單鏈糖蛋白，分子量為70000。α2-AP屬於絲氨酸酶抑制物家族成員之一，在人血漿中α2-AP是主要的纖溶酶抑制物，在控制纖溶中起關鍵作用［1］。為此製備α2-AP單克隆抗體，建立ELISA方法用於纖溶系統的監測，為進一步提高抗原的免疫原性，減少抗原用量，延長抗原釋放時間，用大分子惰性物質如硝酸纖維素膜(NC膜)作為抗原載體進行脾內包埋免疫。我們將抗原吸附於NC膜上，沿小鼠左肩正中線下胸背部縱形切口1cm長，逐層入腹，輕輕牽出脾臟，以刀尖沿脾縱軸輕劃一小口，置入1個三角形載有α2-AP抗原的NC膜，使之完全包埋於脾臟內，觀察無出血後回納脾臟，依次縫合傷口。間隔3w後，用同樣方法再進行1次，於加強免疫後第3天取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞(5∶1)，用PEG-4000常規方法進行融合［2,3］，HAT培養基選擇培養，當克隆長至1/10孔大小時，採用間接ELISA法篩選分泌抗體陽性雜交瘤細胞株，並採用有限稀釋法對陽性雜交瘤細胞進行亞克隆，建立了2株穩定分泌抗-α2-AP單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為3H4和2E3，並用α2-AP採用常規方法免疫家兔，製備抗-α2-AP多克隆抗體血清。對其中的1株3H4進行研究，其雜交瘤染色體眾數為96.37±1.90，分泌的抗體為IgG1亞類，kappa型。ELISA檢測腹水效價1∶106，採用飽和硫酸銨鹽析法從腹水純化McAb 3H4,SDS-PAGE檢測有較高純度。3H4抗體對α2-AP標準品為陽性反應，而對ATIII及纖維蛋白原均為陰性，說明對其無交叉反應。此雜交瘤細胞株3d傳1代，體外傳代培養6個月以上，ELISA檢測抗體滴度無明顯降低。採用ELISA法檢測正常人血漿α2-AP含量，以純化的McAb3H4包板，兔抗α2-AP為多抗，辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG作為三抗，以ABTS為底物，ELISA法檢測了30名正常人枸緣酸鈉抗凝血漿(1∶9)α2-AP含量，其結果為(98±1.99)mg/L。由此可見，製備α2-抗纖溶酶單克隆抗體用以檢測α2-AP，對於了解肝病、血栓性疾病、DIC等許多疾病纖溶改變有著廣泛的套用前景，並可用於溶栓治療監測［4］。■
①中國醫學科學院血液學研究所，天津300000
作者簡介：王玉亮，男，26歲，技師，從事細胞及分子生物學方面的研究
參考文獻：
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［2］黃傳書，金伯泉.用於製備McAb雜交瘤的體內和體外聯合免疫誘導法.單克隆抗體通訊，1993；9(1)：54
［3］鄂 征主編.組織培養和分子細胞學技術.北京：北京出版社，1995：193-198
［4］WohlRC，SinioL，RobbinsKC.Methodsforstudyingfibrinolyticpathwaycomponentsinhumanplasma.ThrombRes,1981;22:281
