微呼吸測試

微呼吸測試的定義

微呼吸測試可直接測定生物個體的耗氧量，個體耗氧量是間接監測進行呼吸作用的生物體新陳代謝狀況的重要指標，耗氧量的變化能夠反映生物體在不同環境中的能量需求。一般可用微呼吸儀進行微呼吸測試。

微呼吸測試研究仔魚對不同鹽度耐受

近年來，夏秋季普遍多雨，而降水易導致近岸海水鹽度變化，進而影響魚類機體的滲透壓調節、能量分配和代謝調整等生理活動，最終威脅魚類的生長和存活。一般而言，魚類鹽度耐受性測試實驗是研究魚類滲透壓調節能力的一種有效方法，直接反映魚類對鹽度的耐受能力。個體耗氧量是間接監測魚體新陳代謝狀況的重要指標，耗氧量的變化能夠反映魚體在不同鹽度環境中的能量需求。許多研究表明，不同的鹽度環境能引起耗氧量的變化，但因實驗魚的種類、適應時間、實驗設計和實驗方法等的不同也會導致耗氧量變化規律有差異[9]。鹽度變化對銀鯧的影響研究相對較少，僅尹飛等研究了低鹽脅迫對銀鯧幼魚腸道消化酶、肝臟抗氧化酶、鰓和腎ATP酶活力的影響。仔魚期是魚類整個生活史中的脆弱敏感階段，也是開展人工育苗成功的關鍵時期之一。郭單勤以銀鯧仔魚為對象，研究鹽度驟變對其存活和耗氧的影響，旨在探究銀鯧仔魚對環境鹽度的耐受能力和耗氧規律，為開展銀鯧仔魚的人工培育和增養殖活動提供理論依據   。

微呼吸測試的方法

採用靜水密閉法。正式實驗開始前，需進行預備試驗以確定耗氧試驗合理持續時間和試驗魚尾數，以保證耗氧變化的可測量性和銀鯧仔魚在實驗期間的正常生理活動。實驗時將自然鹽度培育下的2日齡或4日齡仔魚置於裝有不同鹽度海水微呼吸儀的呼吸瓶(體積約10mL)中，每個鹽度下放各日齡仔魚10尾，海水略高出瓶口少許，立即用微呼吸儀的探頭塞緊密封瓶口，保持瓶內無空氣殘留。仔魚在呼吸瓶中適應穩定20min，記錄之後10min始末呼吸瓶的溶氧量，測定3次。在一天中固定時間(下午16:00～24:00)進行測定，以儘量減小一天中魚體自身耗氧量的差異。實驗期間，為了減少噪音、光照等外界因素引起的耗氧量變化，實驗整個過程均在密閉暗室內進行，避免外界因素影響魚的呼吸。個體耗氧量按下式計算:

R=(DO0－DOt)V/NH

式中，R為個體耗氧量[μmolO2/(尾·h)];DO0為起始時呼吸瓶的溶氧量(mmol/L);DOt為一定時間後呼吸瓶的溶氧量(mmol/L);V為實驗瓶的體積(L);N為受試魚尾數;H為試驗時間(h)   。

不同發育階段銀鯧仔魚的個體耗氧量與鹽度的關係鹽度對銀鯧仔魚代謝水平影響較大，銀鯧仔魚的個體耗氧量在高鹽環境下較高，55鹽度下銀鯧仔魚的個體耗氧量最高，鹽度5最低(圖4)。2日齡銀鯧仔魚急性鹽度突變至鹽度10、20、30，其個體耗氧量沒有顯著性差異，鹽度40和50環境下耗氧量明顯升高;4日齡銀鯧仔魚在鹽度5～40環境下其耗氧量沒有顯著差異，顯著低於鹽度50和55。在不同鹽度環境中銀鯧仔魚的個體耗氧量2日齡均高於4日齡。在高鹽環境(鹽度50和55)中，仔魚入水即表現出急躁不安，遊動速度加快，而後又減慢，並沉於容器底部，身體側臥。在低鹽度水(鹽度5)中，銀鯧仔魚沉於容器底部，幾乎不進行遊動。中間鹽度水體中的銀鯧仔魚開始活動正常，隨著時間的延長，遊動也會逐漸減弱。