簡介
循環核酸最早由 Mandel和Metais於1947年發現（Les acides nucl´eiques du plasma sanguin chez l’homme[J]. C R Hebd Seances Acad Sci (Paris), 1948, 142(3): 241-3），但由於缺乏高靈敏性和高特異性的實驗方法，導致有關血中游離DNA與疾病相關性的研究在較長時期內進展緩慢。直到有效分離游離DNA技術的出現，和特殊螢光染料與PCR技術相結合的檢測技術的套用，使這一領域的研究在最近二十多年得到了較迅速發展。自發現血中游離DNA可含腫瘤細胞DNA相同基因突變後，套用分子生物學手段對循環遊離核酸的研究的興趣日益增加。
提取方法
血漿游離核酸純化試劑盒
1.在兩個1.5ml離心管（用戶自備）中加入20µl蛋白酶K貯存液，再加入200µl同一個血漿樣本。
*不要將蛋白酶K直接加入到BufferVL中。
2．分別加入200µl含CarrierRNA的BufferVL，旋渦振盪約15秒混勻。
3.將離心管置於56°C水浴10分鐘。
4.分別加入320µl無水乙醇，溫和地翻轉4~6次混合均勻。
*為避免打開管蓋時樣品間的交叉污染，開蓋前可低速離心數秒，使管蓋上的溶液沉降到管底。
5.吸取步驟4中的一管混合液加入到核酸純化柱中（核酸純化柱置於2ml離心管中），蓋上管蓋，12000rpm離心30秒。
*注意不要將溶液沾到純化柱管口的邊緣上，以免後續的洗滌步驟不能洗淨純化柱。
6．棄2ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2ml離心管中，將步驟4中的另一管混合液加入到同一個核酸純化柱中。
*濾液無須徹底棄盡，如果要避免粘附在離心管管口的濾液對離心機的污染，可將2ml離心管在紙巾上倒扣拍擊一次。
7．棄2ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2ml離心管中，在核酸純化柱中加入500µlBufferWA,蓋上管蓋，12000rpm離心30秒。
*確認在BufferWA中已經加入無水乙醇。
8．棄2ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2ml離心管中，在核酸純化柱中加入700µlBufferWB,蓋上管蓋，12000rpm離心30秒。
*濾液無需徹底棄盡，如果要避免粘附在離心管管口的濾液對離心機的污染，可將2ml離心管在紙巾上倒扣拍擊一次。
*確認在BufferWB中已經加入無水乙醇。
9．棄2ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2ml離心管中，14000rpm離心1分鐘。
*如果離心機的離心速度達不到14000rpm，則用最高速離心2分鐘。
*請勿省略該步驟，否則可能因所純化的核酸中混有乙醇而影響後續的PCR效果。
10.棄2ml離心管，將核酸純化柱置於一個試劑盒提供的1.5ml離心管中，在純化柱的膜中央加入25-30µl56℃預熱的BufferTE，蓋上管蓋，室溫靜置1分鐘，12000rpm離心30秒。
11.棄純化柱，洗脫的血漿游離核酸可立即用於PCR或RT-PCR檢測，或者將血漿游離核酸儲存於-20℃備用。
醫學套用
血中游離DNA在疾病的早期診斷、預後、監測等方面具有重要潛在價值。其具體醫學套用大致包括以下方面：
1. 用於產前診斷；
2. 用於免疫性疾病等非腫瘤類疾病的病情分析與療效觀察；
3. 用於腫瘤相關分析。
在上述三類套用中，其在腫瘤分析中的價值尤為重要，雖然目前血中游離DNA分析尚未列為臨床必需的檢測指標，但數以千計的研究論文和大量一期和二期臨床試驗的數據，有力支持這一新技術在腫瘤防治中的巨大套用價值：
腫瘤的早期診斷；
腫瘤治療方案確定；
腫瘤療效觀察；
腫瘤預後評估；
腫瘤轉移風險分析；
腫瘤復發監測。
