簡介
在幹細胞的實驗操作中，凍存的幹細胞要進行復甦，再培養傳代，這一技術稱為乾細胞復甦。冷凍的幹細胞活化原則為快速解凍，使之迅速通過細胞最易受損的－5～0℃，以避免冰晶重新結晶而對幹細胞造成傷害導致幹細胞的死亡。幹細胞復甦時常用的保護劑有二甲亞碸（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透幹細胞。幹細胞活化後約需數日，或續代一至二代，其細胞生長和特性才會表現正常。幹細胞成功復甦後對其活力的影響不大。
幹細胞復甦的主要操作過程
1. 從液氮罐中取出凍存管。（有時因凍存管未封嚴，浸入了液氮，取出後因凍存管內液氮迅速氣化而發生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。）
2. 迅速放入盛有 36℃～37℃水的恆溫水浴鍋中，並不時搖動，儘快解凍。
3. 剪開紗布口袋，取出凍存管，用75%酒精擦拭消毒後，在超淨台中打開凍存管，用吸管吸出幹細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養液，吹打使幹細胞懸浮。
4. 低速離心（500～1000rpm）5～10min，棄去上清液後再重複2次用培養液漂洗、離心。
5. 加入培養液適當稀釋後，再裝入培養瓶中，置溫箱培養，次日更換一次培養液後再繼續培養。
在幹細胞復甦操作中應注意問題
1. 自液氮取出凍存管後，首先要檢查蓋子是否鏇緊，由於熱脹冷縮過程，此時蓋子易鬆動。
2. 一管細胞一般可分裝到1-2隻培養瓶中，分裝過多，幹細胞濃度過低，不利於細胞的貼壁。
3. 加培養基的量和DMSO的濃度有關，如果加入培養基量過少，相對DMSO的濃度就會較大，從而影響幹細胞生長，DMSO的濃度在小於0.5%-1%的時候對一般幹細胞沒有影響。所以若凍存液DMSO濃度為10%，需加10ml以上的培養基才恰好稀釋至無害濃度。
幹細胞復甦後存活率的計算
取一滴凍存細胞懸液，台盼蘭染色，活細胞不上色，死細胞染成蘭色，計算細胞存活率：
存活率=（細胞總數－死細胞數）/細胞總數×100%
