簡介
導數光譜法亦稱微分光譜,屬紫外吸收光譜派生的一個分支, 由於對複雜組分可不經分離而直接測定,方法簡便、快速、準確,近年來得到迅速發展和廣泛套用。
基本原理
導數光譜法的基本原理如同紫外吸收光譜吸收度(A)對波長λ的函式圖類似,是吸收光譜關於波長的微分係數(dA/dλ)對波長(λ)的函式圖。 零價光譜(即通常的紫外光譜)中的 A=f(λ),當波長增加一個增量△λ時,則 A 將增加△A,因此A+△A=f( λ +△λ )
△A=f(λ+△λ)-A=f(λ+△λ)-f(λ)
△A/△λ=[ f(λ+△λ)-f(λ)]/△λ
吸收度(A)關於波長的導數 dA/dλ就是當 △λ趨近於零時△A/△λ的極限,可用下式表示:
dA/dλ=lim/△λ→。△A/△λ=lim/△λ→。[f(λ+△λ)-f(λ)]/△λ
實際上,dA/dλ就是 A 關於在增量(△λ)區間吸收度的平均變化率(即斜率)。
一價導數光譜就是零階光譜按一定的波長間隔(△λ)測得變化率(dA/dλ)對應于波長而得的圖譜。 同理,有二階導數光譜 d A/dλ 、三階導數光譜d A/dλ ……等,理論上有d / Adλ (n =1,2,3………n),但實際目前僅有測四階導數光譜的報導。 雖然目前國外新型儀器有測六階、七階的介紹,仍未見文獻套用的報導。 因為隨著階數的增加,解析度有所提高,而靈敏度卻隨著降低,通常以一階和二階導數光譜的套用較多。
導數光譜定量測定的基本原理系根據 Beer' s定律,即 A=ECL。 其一階導數 dA/dλ=CL。 即導數值與濃度成正比。 同理,d A/dλ ∝C;d3A/dλ3∝C…… …;d A/dλ ∝C。(n =1,2,3……),即二階、三階…… n 階導數值皆與濃度成正比。 因此,由光學法獲得的導數光譜可用於定量測定,通常為導數光譜中的波峰與波長垂直距離與藥物濃度成正比。
電子學法求導數光譜時,由於儀器設計採用微分線路直接產生導數光譜,實驗選定分光光度計的掃描速度垣定,而d A/dt∝C,(n =1,2,3……),即吸收度隨時間的變化與波度成正比,故由電子學法掃描的導數光譜亦可用於定量測定 。 一般新型儀器都有這一功能。
在導數光譜定量測定方法中,通常以峰一谷的距離或稱振幅的大小對濃度作圖,按標準曲線回歸方程求含量