實驗性變態反應性腦脊髓炎動物模型

實驗性變態反應性腦脊髓炎(EAE)是一種以特異性致敏的CD4+T細胞介導為主的,以中樞神經系統內小血管周圍出現單個核細胞浸潤及髓鞘脫失為特徵的自身免疫性疾病,是人類多發性硬化(MS)的理想動物模型,在臨床神經免疫學的研究中具有重要意義。

實驗性變態反應性腦脊髓炎動物模型
實驗性變態反應性腦脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE) 是一典型的實驗模型。早在1944年Ferraro根據對一系列實驗結果的總結,指出EAE和人的脫髓鞘病有相似之處。1947年Freund等報告,以脊髓加Freund佐劑(FA) 進行免疫,僅需一次注射就能引起豚鼠EAE,而且成功率相當高。以後,以兔、小鼠、大鼠、 田鼠動物用同樣方法均能複製成功,以豚鼠最為敏感。這裡介紹用同種脊髓加FA進行免疫複製EAE的方法。
Freund氏左劑的製備參照Paterson的製法,液體石臘(c.p)8.5ml,無水羊毛脂(c.p)1.5ml,結核菌。用上述混合液配成4mg/ml的FA。高壓滅菌後使用。

脊髓組織懸液:

於實驗當時,在無菌條件下先將豚鼠肝素化,然後經胸主動脈用生理鹽水灌洗至無血。取出脊髓,除去脊膜,稱重,用玻璃研磨器將脊髓研成勻漿,以生理鹽水配製成50%懸液。
脊髓-FA乳劑的製備:將脊髓組織懸液與FA按1:1混合,用注射器反覆抽注,即成乳劑。
選用體重400g左右的豚鼠,於豚鼠的四個足掌肉墊各注射脊髓-FA 0.1ml, 每隻豚鼠共注射0.4ml。注射後按常規飼養。
免疫注射半月後,血清中逐漸出現抗脊髓抗體,皮膚試驗呈延緩反應,而且豚鼠陸續出現後肢癱瘓,甚至大小便失禁,很易死亡。
血清補體結合反應:由豚鼠心臟抽血,以3,000轉/分離心30分鐘分離血清。 抗原為1%脊髓生理鹽水懸液,也經3,000轉/分離心1小時,取其上清液作試驗用。補體為2套用單位,溶血系統為2%綿羊紅細胞及2單位的溶血素。

皮膚試驗:

將豚鼠背部剃毛,用10%同種脊髓生理鹽水懸液0.1ml作皮內注射, 注後當時及24、48小時觀察皮膚反應。本實驗在注後當時不見皮膚反應,而在24小時出現紅斑或硬結,48小時仍存在,所以是延緩型反應。
組織學檢查:在實驗終了時處死動物,取出腦及脊髓等欲檢查的臟器,福馬林固定,常規切片、染色作鏡檢。可見脊膜及中央管周圍有明顯的淋巴樣組織浸潤、增厚,脊髓白質內有細胞浸潤的小灶狀病變及靜脈周圍呈套袖樣浸潤。神經細胞有壞死,細胞核消失呈勻質小體,或細胞體消失留下一空隙,以及細胞周圍有圓細胞浸潤等。在腦組織中可見到腦膜增厚,淋巴樣細胞及單核細胞浸潤。室管膜及脈絡膜亦呈同樣變化。小靜脈及毛細血管周圍,則呈套袖狀細胞浸潤。腦實質內有小膠質細胞組成的浸潤灶。有些星狀細胞呈核碎裂、胞漿蒼白、細胞變形等。上述變化以脊髓的病理改變和癱瘓最為一致,是最特異的變化,僅見於注射脊髓加FA引起癱瘓的動物。血清抗體雖也有特異性,但與癱瘓或脊髓病變的程度無一致性關係;而皮膚反應則既有特異性,又與癱瘓及脊髓病變呈一致性。文獻報導還曾指出,這種模型不能用血清抗體進行傳遞,但用淋巴細胞被動傳遞則能成功。提示病變的本質屬於細胞免疫機制。至於腦內的變化,特異性較差,用FA或其它組織懸液加FA注射的動物也能發現,唯程度輕的多,可能是FA本身引起的,也可能因為其它組織和腦脊液之間有某些共同抗原性,從而引起交叉反應之故。

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