SMC技術定義:
單分子檢測(Single Molecule Counting, SMC)是對溶液樣品中的特定種類單個分子進行檢測和統計,從而對溶液濃度進行檢測的定量方法。
SMC技術原理:
單分子檢測主流的檢測技術以Erenna等單分子檢測平台為代表,利用毛細管進行免疫螢光標記分子的上樣,並以雷射聚焦的方式進行激發檢測。當螢光素標記分子通過高能量的雷射焦點時,螢光素所發射的光閃爍信號被檢測器測得。光閃爍信號的次數和強度與分子濃度呈正相關性,從而能建立標準曲線。通過對一定時間之內光閃爍信號進行統計,可以對溶液濃度進行定量檢測 。
SMC單分子免疫檢測技術的主要特點:
突破性的超高檢測靈敏度
SMC單分子免疫檢測技術與酶聯免疫吸附劑測定(ELISA)操作一樣簡便,但靈敏度可達到ELISA的約1000倍,成功實現濃度在fmol級別蛋白靶標的檢測。高能量的雷射通過愛里斑聚焦於溶液里的單個螢光素標記二抗分子,產生的螢光閃爍進行數位化計量,從而實現“單分子檢測”。靈敏度遠高於傳統ELISA,Multiplex等技術的全新單分子檢測方法使種類遠多於已知蛋白的未知蛋白靶標檢測成為現實,將帶來全新的基礎和轉化醫學新發現。
寬至4個log的大動態檢測範圍
以Erenna為例,動態檢測範圍超過4個log,有利於蛋白靶標表達量存在巨大差異的樣本進行同時檢測。
根據靶標豐度靈活選擇實驗方案
既可使用磁珠又可使用普通96孔板作為抗體包被介質。在靈敏度和成本方面取得了巧妙平衡。
便於自行開發檢測試劑盒
開創性的新技術往往會套用於開創性的工作。如果檢測的是全新的標誌物,商業化的整套試劑盒開發工具,可在極短時間內開發新檢測試劑盒。
1.突破性的超高檢測靈敏度
fmol級別蛋白靶標的檢測
2.寬至4個log的大動態檢測範圍
以Erenna為例,動態檢測範圍超過4個log,有利於蛋白靶標表達量存在巨大差異的樣本進行同時檢測。
3.根據靶標豐度靈活選擇實驗方案
既可使用磁珠又可使用普通96孔板作為抗體包被介質。在靈敏度和成本方面取得了巧妙平衡。
4.便於自行開發檢測試劑盒
開創性的新技術往往會套用於開創性的工作。如果檢測的是全新的標誌物,商業化的整套試劑盒開發工具,可在極短時間內開發新檢測試劑盒。
SMC技術發展歷程:
•1996年,Chen等學者成功進行了藻紅蛋白的單分子免疫檢測( Chen D, et al. Anal Chem, 1996, 68(4):690—696.);
•同年,Craig等學者利用單分子免疫檢測技術檢測了鹼性磷酸酶(Craig B, et al. Anal Chem, 1996, 68(4):697—700.);
•1998年,Fister等學者進行了羅丹明6G分子的單分子免疫檢測(Fister C, et al. Anal Chem, 1998, 70(3):431—437. );
•2004年,美國Singlux公司在St. Louis成立,專注於單分子檢測技術的開發。此後總部於2006年遷移至加州 ;
•2007年,Singlux公司發明了第一台套用SMC單分子免疫檢測技術的檢測儀器——Erenna;
•2012年,Singlux公司開放了Erenna平台的試劑盒開發技術;
•2014年,德國Merck公司收購Singluex公司,將Erenna推向商業套用,目前配合Erenna的試劑盒已超過50種 。