cNDA末端快捷克隆技術

CDNA 末端快速克隆(rapid amplification of cDNA ends,RACE) 技術可用於構建全長的CDNA 文庫。像PCR CDNA 文庫構建方法一樣，RACE 方法及其構建文庫方法也在不斷改進和完善。由於RACE 方法包括反轉錄、末端轉移和PCR 擴增三個重要環節，與PCRCDNA 文庫構建方法的程式十分類似，PCRcDNA 文庫構建方法改進的成果也加快了RACE方法的發展。

它以PCR技術為基礎，從部分已知的CDNA序列擴增出其他未知部分的5”端和3端的CDNA 序列。因此該方法也被稱為錨定PCR (anchored PCR) 和單邊PCR (onesidePCR)。RACE 的引物設計包括錨定引物和基因特異引物在3' RACE中。Q0、Q1、QT為3 個錨定引物; Q1引物含有編碼HindI,Sst I、及Xho I的識別位點;QO 與Q1通過一個核苷酸重疊，兩者組合後再加上17 個oligo- (dT) 序列就構成了QT 引物(5'-Q0-Q1-TTTT-3' ); GSP1、GSP2 為兩個基因特異引物，是根據已知的CDNA 部分序列設計成的。以QT 反轉錄總RNA 得到第一條cDNA; 再用QO與GSP1以第一條CDNA 為模板進行第一輪PCR 擴增，得到雙鏈cDNA,最後用嵌套引物(Q1與GSP2) 進行第二輪PCR 擴增防止產生非特異性擴增產物。