ABC免疫酶染色法
ABC法是ABC免疫酶染色法的簡稱,又稱卵白素-生物素-酶複合物染色法，是目前最敏感的免疫細胞化學染色法之一。其基本原理是將特異性一抗與組織細胞相應抗原結合後，通過生物素花橋與一抗結合，藉助卵白素與生物素的天然親和性將生物素化辣根過氧化物酶連結為複合物，通過酶促反應，顯示組織細胞相應的抗原。
使用的主要材料
使用的主要材料：PBS；T-ris-HCl緩衝液；底物溶液；ABC試劑盒；小鼠（兔）特異性抗體；蓋片染色缸。濕盒，顯微鏡等。
染色的基本步驟
染色的基本步驟：
1：細胞準備。將7mm x 22mm蓋片置於培養瓶中，加入對數生長期細胞懸液於培養瓶中，待細胞長成單層，取出蓋片，用PBS洗2次；懸浮生長的細胞離心後用PBS離心洗滌2次，製成細胞塗片。
2：細胞固定。用醋酸/甲醇或95%酒精固定20-30min。
3：取已固定的細胞蓋片，用PBS洗5min，浸入37℃的0.75%H2O2-PBS中3min，以阻斷內源性過氧化物酶。
4：PBS振洗2次，每次3min。
5：滴加正常馬血清，在濕盒內，37℃保溫30min，以消除非特異性染色。
6：棄去正常馬血清，滴加小鼠特異性抗體，在濕盒呢37℃保溫30-60min或4℃過夜。
7：PBS振洗2次，每次3min。滴加生物素化馬抗小鼠IgG,在濕盒內37℃ 30min。
8：PBS振洗3次，每次3min，滴加ABC試劑，在在濕盒內37℃ 30min.
9：PBS振洗2次，THB振洗1次，每次3min，浸入新鮮配製的底物溶液，在室溫下置暗處10-20min。
10：自來水洗5min
11：細胞核染色。浸入蘇木精染液染色2min，自來水洗，迅速過鹽酸酒精溶液，自來水洗，過氨水溶液，自來水洗。
12：逐級脫水。過70%酒精1次，95%酒精2次，無水乙醇3次，每次1min。
13：透明，過二甲苯溶液3次，每次1min。
14：將有細胞的面向下，用中性樹脂封片。
此種染色方法應設定陽性對照、陰性對照、空白對照及抑制試驗，以排除非特異性染色。要控制顯色反應時間，以陽性反應著色最強，而有的是剛開始著色為佳。滴加抗體的量要適當，防止液體乾涸。空白對照用PBS做一抗。抑制試驗是將待檢標本與未標記特異性抗體反應後，再用自己標記的特異性抗體進行染色，結果陽性強度減弱或轉為陰性。
此法染色結果在光鏡下觀察，陽性部分呈棕褐色。
