內容簡介
分子生物學和物理學是離子通道研究中極為重要的兩種方法，本書基於這一角度選取了部分有代表性的研究方法。章節作者在闡述某種研究方法時，使用了大量的圖表並與其他方法進行比較，提供一些竅門和捷徑使其可以適用於其他研究體系。本書語言簡明易懂，適合初涉離子通道領域的研究者，對有經驗的研究人員也極具參考價值。
目錄
撰稿人
前言
第一部分 組裝
1.離子通道的組裝
Ⅰ.引言
Ⅱ.策略和方法
參考文獻
第二部分 遺傳學
2.通過酵母雙雜交系統鑑定離子通道關聯的蛋白質
Ⅰ.引言
Ⅱ.酵母雙雜交系統的原理
Ⅲ.材料和方法
Ⅳ.酵母雙雜交系統的局限、前景和展望
附錄:溶液
參考文獻
第三部分 電生理學
3.囊性纖維化跨膜轉運調節因子氯離子通道的膜片鉗研究
Ⅰ.引言
Ⅱ.表達體系的選擇
Ⅲ.膜片鉗技術
Ⅳ.CFTR通道的通透性
Ⅴ.CFTR氯離子通道的調控
Ⅵ.DRSCAN:一種用於長時間記錄分析的兼容性程式
附錄
參考文獻
4.秀麗隱桿線蟲(C. elegans)神經元的緊密封接全細胞膜片鉗
Ⅰ.引言
Ⅱ.概述
Ⅲ.用於原位電生理的C. elegans的製備
Ⅳ.亞微米開度的膜片鉗的構成
Ⅴ.溶液
Ⅵ.膜片鉗設定
Ⅶ.GFP標記的神經元記錄
Ⅷ.緊密封接的全細胞記錄
Ⅸ.小細胞膜片鉗記錄的闡釋
Ⅹ.電壓的空間控制
Ⅺ.前景
Ⅻ.總結
參考文獻
5.門控電流
Ⅰ.引言
Ⅱ.門控電流的研究
Ⅲ.單通道電荷
Ⅳ.檢測?的問題
Ⅴ.分離中的問題
Ⅵ.電壓鉗
Ⅶ.記錄步驟
Ⅷ.門控電流的記錄
Ⅸ.基本門控事件
Ⅹ.頻域門控電流的記錄
參考文獻
6.離子通道通透性質的確定
Ⅰ.引言
Ⅱ.單離子電勢
Ⅲ.離子通道的選擇性
Ⅳ.離子孔道的分類
Ⅴ.孔道阻斷研究
Ⅵ.孔道占有情況的確定
Ⅶ.結論
參考文獻
第四部分 表達體系
7.通過塞姆利基森林病毒(SFV)和桿狀病毒表達配體門控的離子通道
Ⅰ.引言
Ⅱ.病毒DNA或RNA的生成
Ⅲ.宿主細胞的選擇和培養
Ⅳ.病毒的擴增和滴定
Ⅴ.實驗參數的最佳化
Ⅵ.桿?病毒和SFV表達離子通道的套用
Ⅶ.結論
參考文獻
8.由重組腺病毒介導的編碼離子通道和突觸功能相關分子的基因在神經系統中的表達
Ⅰ.引言
Ⅱ.重組腺病毒的準備
Ⅲ.技術
Ⅳ.鉀離子通道的表達
Ⅴ.腺病毒在急性海馬腦片生理學中的套用
Ⅵ.未來的方向
參考文獻
9.異源離子通道的瞬時表達
Ⅰ.更新
Ⅱ.引言
Ⅲ.方法
Ⅳ.結果
Ⅴ.總結
參考文獻
第五部分 模型模擬
10.離子通道的電腦模擬和建模
Ⅰ.引言
Ⅱ.基礎統計方法
Ⅲ.勢能
Ⅳ.非線性Poisson-Boltzmann方程
Ⅴ.模擬步驟總結
參考文獻
第六部分 物理
11.測定離子通道活性的螢光技術
Ⅰ.引言
Ⅱ.實驗步驟
Ⅲ.藥理驗證試驗
Ⅳ.鈣離子高度應答性離子通道
Ⅴ.鈣離子中度應答性離子通道
Ⅵ.鈣離子低度應答性離子通道
Ⅶ.基於螢光染料測定離子通道活性的鈣離子濃度試驗的局限
Ⅷ.基於螢光染料鈣離子濃度試驗的優勢
參考文獻
12.分析離子通道結構和功能的配體結合方法
Ⅰ.修改文稿介紹
Ⅱ.引言
Ⅲ.方法比較
Ⅳ.方法
Ⅴ.螢光配體結合試驗
Ⅵ.配體結合分析
Ⅶ.熱動力循環分析
參考文獻
13.二維結晶、冷凍電鏡和成像分析決定的膜蛋白三維結構
Ⅰ.引言
Ⅱ.電子冷凍晶體學的膜蛋白結構分析的步驟
Ⅲ.圖譜闡釋
Ⅳ.結論
參考文獻
14.毛細管電泳的電壓鉗生物感受器
Ⅰ.引言
Ⅱ.毛細管電泳
Ⅲ.斷裂電泳毛細管的構成
Ⅳ.細胞製備
Ⅴ.毛細管電泳膜片鉗記錄
Ⅵ.雙電極電壓鉗記錄
Ⅶ.總結
參考文獻
15.離子通道作為監控脂雙層與膜蛋白相互作用的工具:短桿菌肽作為分子力的傳遞者
Ⅰ.近期發展
Ⅱ.引言
Ⅲ.蛋白質構象改變和脂雙層擾動
Ⅳ.膜擾動和通道功能
Ⅴ.膜變形的能量
Ⅵ.載體與通道報告蛋白的選擇
Ⅶ.分子力傳遞者
Ⅷ.測定ΔG<sup>(I→II)</sup><sub>bilayer</sub>和現象的彈力常數
Ⅸ.結論
參考文獻
第七部分 純化和重組
16.上皮囊性纖維化跨膜轉運調節因子氯離子通道的純化和重構
Ⅰ.更新
Ⅱ.引言
Ⅲ.CFTR在Sf9-桿狀病毒系統中的表達
Ⅳ.CFTR的溶解和純化
Ⅴ.CFTR的重組
Ⅵ.重組CFTR通道功能特徵的估測
參考文獻
17.天然和克隆的通道在平面脂雙層的重組
Ⅰ.更新
Ⅱ.引言和概述
Ⅲ.大鼠肌肉T-小管細胞膜:一種K<sup>+</sup><sub>ca</sub>通道和Na<sup>+</sup><sub>v</sub>通道的可靠資源
Ⅳ.天然組織中各種類型離子通道的製備和重組
Ⅴ.克隆和異源表達的通道重組到平面脂雙層的方法
參考文獻
第八部分 第二信使和生化方法
18.配體門控離子通道的蛋白質磷酸化
Ⅰ.引言
Ⅱ.配體門控離子通道磷酸化的生化性質分析
Ⅲ.配體門控離子通道磷酸化的功能作用
Ⅳ.結論
參考文獻
19.離子通道關聯蛋白的分析
Ⅰ.引言
Ⅱ.總體考慮
Ⅲ.重組蛋白的體外結合
Ⅳ.全長蛋白質在異源細胞中的整合
Ⅴ.離子通道和關聯蛋白在體內的共定位
Ⅵ.天然組織中離子通道和關聯蛋白的免疫共沉澱
Ⅶ.結論
參考文獻
20.離子通道的第二信使調控/植物膜片鉗
Ⅰ.更新
Ⅱ.引言
Ⅲ.暴露膜
Ⅳ.植物細胞與動物細胞膜片鉗的對比
Ⅴ.離子通道的第二信使調控
Ⅵ.結論性評語
附錄
參考文獻
第九部分 特殊離子通道
21.ATP敏感性鉀離子通道
Ⅰ.引言
Ⅱ.藥物合成
Ⅲ.組織培養
Ⅳ.轉染操作
Ⅴ.銣外流檢測
Ⅵ.膜的分離
Ⅶ.游標操作
Ⅷ.受體溶解
Ⅸ.SUR1的部分純化
Ⅹ.額外純化步驟
Ⅺ.沉降
Ⅻ.結合檢測
參考文獻
22.研究機械力門控通道的簡化快速壓力鉗技術
Ⅰ.引言
Ⅱ.簡化壓力鉗的機械排布
Ⅲ.壓力鉗的電子控制
Ⅳ.構建的一些實踐經驗
附錄
參考文獻
23.抑制性甘氨酸受體的異源表達和純化
Ⅰ.引言
Ⅱ.哺乳動物脊索中甘氨酸受體的純化
Ⅲ.甘氨酸受體的異源表達
Ⅳ.HEK293細胞中瞬時表達
Ⅴ.2×BBS
Ⅵ.桿狀病毒系統
參考文獻
24.Aquaporin水分子通道蛋白的功能分析
Ⅰ.引言
Ⅱ.紅血球AQP1蛋白的純化
Ⅲ.AQP1在酵母中的表?
Ⅳ.AQP1重組到蛋白脂質體中
Ⅴ.AQP1蛋白脂質體的水滲透
Ⅵ.用簡併寡核苷酸PCR對Aquaporins的同源克隆
Ⅶ.表達AQP1蛋白的蛙卵的水滲透
參考文獻
第十部分 毒素和其他膜活性化合物
25.離子通道的Conus多肽探針
Ⅰ.引言
Ⅱ.Conus探針的生化概述
Ⅲ.處理Conus多肽中的一些實踐經驗
參考文獻
26.蠍毒作為研究鉀離子通道的工具
Ⅰ.引言
Ⅱ.蠍毒液中鉀離子通道多肽抑制劑的純化
Ⅲ.通過重組技術合?鉀離子通道抑制劑多肽
Ⅳ.鉀離子通道抑制性多肽的放射性標記
Ⅴ.受體結合研究
Ⅵ.總結
參考文獻
27.利用平面脂雙層快速篩選膜活性化合物
Ⅰ.更新
Ⅱ.引言
Ⅲ.一種新的雙層膜系統
Ⅳ.平面脂膜的設定和區室
Ⅴ.材料
Ⅵ.平面脂膜灌流技術的套用
參考文獻
28.離子通道抗體
Ⅰ.引言
Ⅱ.人類疾病中自發產生的抗體
Ⅲ.配體門控的受體
Ⅳ.電壓門控型離子通道
Ⅴ.商業產品
參考文獻
索引
