蛋白質意義
幾乎所有的蛋白質合成都起始於N-端,蛋白質N-端的序列組成對於蛋白質整體的生物學功能有著巨大的影響力。例如N-端序列影響蛋白質的半衰期,同時關聯著蛋白亞細胞器定位等,這些與蛋白的功能和穩定性息息相關,對蛋白進行N-端測序分析,有利於幫助分析蛋白質的高級結構,揭示蛋白質的生物學功能。
序列的方法
目前對蛋白N端測序主要分類兩大類,其一為非質譜技術,例如經典的Edman降解法、利用反轉錄RT-PCR得到對應蛋白的cDNA,再來反推得到蛋白序列;其二為質譜技術。各自都有其使用的長處和制約之處,目前,市面上採用的,依然是基於經典的Edman降解法原理,利用美國ABI公司Procise491蛋白序列測序系統進行蛋白N-端測序。
測序的原理
蛋白質和多肽N-端測序技術是以Edman化學降解法為基礎的,Edman化學降解,其基本原理是包括通過異硫氰酸苯脂與蛋白質和多肽的N-端殘基的偶聯,苯氨基硫甲醯酞(PTC-肽)環化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)轉化為苯異硫尿胺基酸(PTH-胺基酸)三個主要的化學步驟,每個循環從蛋白質與多肽裂解一個胺基酸殘基,同時暴露出新的游離的胺基酸進行下一個Edman降解,最後通過轉移的PTH-胺基酸鑑定實現蛋白質序列的測定。