簡介
CAS登錄號：11076-19-0中文名稱：米酵菌酸
英文名稱：BONGKREKIC ACID
別名：(r-(r*,s*(e,z,z,e,e,z,e)))--trimethyl;2,4,8,10,14,18,20-docosaheptaenedioicacid,20-(carboxymethyl)-6-methoxy-2,5,17;3-carboxymethyl-17-methoxy-6,18,21-trimethyldocosa-2,4,8,12,14,18,20-heptaen;edioica
產品分子結構：
分 子 式：C28H38O7
分 子 量：486.6
米酵菌酸的毒性
椰毒假單胞菌酵米麵亞種發酵玉米面製品、變質鮮銀耳及其它變質澱粉類製品是引起中毒的主要原因，常見的食品有糯米麵湯圓、吊漿粑、小米或高粱米麵製品、馬鈴薯粉條、甘薯澱粉等。
毒性：椰毒假單胞菌產生一種叫米酵菌酸的毒素，損害人的肝、腦、腎等器官。米酵菌酸耐熱，一般烹調方法不能破壞其毒性，但日曬兩日後可去除94%以上變質銀耳中的毒素。椰毒假單胞菌酵米麵亞種食物中毒多發生在夏、秋季節。潮濕、陰雨的天氣，再加上儲存不好，椰毒假單胞菌在食物中大量地生長繁殖，吃了這種食物就會發生中毒。
中毒表現：進食後2~24小時出現上腹不適，噁心、嘔吐（嘔吐為胃內容物，重者呈咖啡色樣物），輕微腹瀉、頭暈、全身無力等。重者可出現皮膚黃染、肝脾腫大、皮下出血、嘔血、血尿、少尿、意識不清、煩躁不安、驚厥、抽搐、休克等，體溫一般不升高，病死率高達40%~100%。
緊急處理：立即手法或藥物催吐，催吐後口服活性炭，並儘快到醫院治療。凡與患者吃過同種食物的人，不論是否發病，一律送往醫院觀察、治療。
中毒預防：嚴禁用浸泡、霉變的玉米製作食品。家庭製備發酵穀類食品時要勤換水，保持衛生，要保證食物無異味產生，最好的預防措施是不製作、不食用酵米麵。禁止出售發霉變質的鮮銀耳。學會正確辨別銀耳的質量。正常乾銀耳水泡發後，朵形完整、較大，菌片呈白色或微黃，彈性好，無異味；變質銀耳不成形、發黏、無彈性，菌片呈深黃至黃褐色，有異臭味。發好的銀耳要充分漂洗，食用前要摘除銀耳的基底部
米酵菌酸的測定
椰毒假單胞菌酵米麵亞種產生的一種可以引起食物中毒的毒素。系統命名為：3-羧甲基-17-甲氧基-6，18，21-三甲基-廿二碳-2，4，8，12，14，18-七烯二酸。1. 薄層色譜測定
（1）原理：樣品中的米酵菌酸經提取、淨化及濃縮後，根據其在短波紫外光GF254矽膠薄層色譜上顯示黑色點的最低檢出量測定含量。
（2）儀器
① 層析槽（內徑長25cm×寬6cm×高4cm）；
② GF254矽膠薄層（50mm×200mm×0.3mm），自製，經110~115℃活化2~3h，置乾燥器中可保存一周；
③ 紫外線燈（波長254nm）；
④ 紫外分光光度計。
（3）試劑
矽膠 GF254層析用：
薄層色譜展開劑：石油醚-無水乙醚-冰乙酸（60+40+1.5V/V）；
① 米酵菌酸標準液：稱取米酵菌酸標準品，用甲醇配製成每毫升含有米酵菌酸20ug作測定用。置於4℃冰櫃中避光保存；
② 甲醇：分析純；
③ 冰乙酸：分析純；
④ 石油醚：分析純，沸程30~60℃；
⑤ 無水乙醚：分析純；
⑥ 三氯甲烷：分析純；
⑦ 85%磷酸：分析純；
⑧ 4%碳酸氫鈉水溶液；
⑨ 6mol/L鹽酸：分析純。
（4）米酵菌酸的提取：酵米麵、乾銀耳樣品經粉碎過40目篩後，稱取20g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20mL，於室溫中避光浸泡1h，然後再加入三氯甲烷80mL和85%磷酸0.2mL；稱取10g經剪碎、磨細及混勻後的鮮銀耳，加入甲醇16mL於室溫中避光浸泡1h，然後再加入三氯甲烷64mL和85%磷酸0.16mL，振盪30min，過濾，取濾液40~50mL。
將以上濾液移入分液漏斗中，加入與濾液體積相同的4%碳酸氫鈉水溶液，振搖2min，靜置分層，用帶自動控制球吸管吸出上層於另一分液漏斗中，再用4%碳酸氫鈉水溶液重複提取兩次，每次10mL，輕搖，靜置，將三次碳酸氫鈉水層合併，加入三氯甲烷25mL，振搖2min，靜置分層後棄去三氯甲烷層。於分液漏斗中慢慢滴入6mol/L鹽酸調該溶液pH至2~3，加入石油醚（沸程30~60℃）40~50mL，振搖3min，靜置分層，吸出石油醚層於梨形瓶中，再重複用石油醚30mL和20mL各提取一次，將石油醚層併入同一瓶中，於40℃水浴中減壓吹氣濃縮至乾，用甲醇移至帶1mL刻度的濃縮管中，於40℃用減壓法濃縮至0.2mL以下，並用少許甲醇洗管壁，繼續濃縮至乾，加甲醇0.125mL，將乾物質溶解，混勻，作為樣液以供薄層色譜測定用。
（2）薄層色譜測定
用微量注射器滴加20μ g/mL標準液8uL與10uL兩個點，以及兩個樣液點，每點10uL（鮮銀耳樣品滴加20μL）。用展開劑展開16cm，取出揮乾。在254nm紫外燈光下觀察結果如下：①標準點應出現黑色點；②如樣點在標準點相應位置上未出現黑色點，則樣品中米酵菌酸的含量在測定方法靈敏度0.25ug/g以下；如在相應位置上有黑色點，而另一點中樣液與標準點重疊，則為陽性。根據樣液黑色點的強度估計減少滴加微升數，或經稀釋後再滴入不同微升數，直至樣液與標準色點的強度與面積一致為止。米酵菌酸的比移值為0.22。
（6）計算公式
………（1）
式中：0.2――米酵菌酸的最低檢出量，ug；
V1――加入甲醇溶解的體積，mL；
V2――出現最低檢出量時滴加樣液的體積，mL；
D――樣液的總稀釋倍數；
M――甲醇溶解時相當樣品的質量，g。
（7）確證試驗：對含量高的樣品可以進一步做確證試驗。將剩餘的陽性樣液與空白甲醇液分別經薄層分離後，刮下並收集與米酵菌酸標準相應的色譜帶與空白處矽酸。各加甲醇4mL，於室溫中浸泡1~2h，混勻，離心，吸出上清液，以空白矽膠甲醇洗脫液作對照，用紫外分光光度計測定，應在267nm與236nm處有米酵菌酸的兩個最高吸收峰。
2. 高效液相色譜測定法
（1）原理：樣品中的米酵菌酸經提取、淨化及濃縮後，根據在高效液相色譜上的出峰面積測定含量。
（2）儀器
① 高效液相色譜儀；
② 20μL樣品環；
③ 分光光度檢定器，調波長至267nm；
④ 求積儀；
⑤ 防護柱4.6mmID×5cm，內裝C-18矽膠10μm；
⑥ 分析柱Altex Ultrasphere TM-ODS5um，4.6mmID×25cm。
（3）試劑
① 高效液相色譜洗脫劑：甲醇-水-冰乙酸[75+27+1.7（V/V）]；在配製前，所用試劑及水均需分別重蒸餾。
② 米酵菌酸標準液：稱取米酵菌酸標準品，用甲醇配製成每毫升含有米酵菌酸20μg作測定用。置於4℃冰櫃中避光保存；
③ 甲醇：分析純；
④ 冰乙酸：分析純；
⑤ 石油醚：分析純，沸程30~60℃；
⑥ 無水乙醚：分析純；
⑦ 三氯甲烷：分析純；
⑧ 85%磷酸：分析純；
⑨ 4%碳酸氫鈉水溶液；
⑩ 6mol/L鹽酸：分析純。
（4）米酵菌酸的提取
同薄層色譜法，但最後用甲醇轉移時，直接於瓶內加入甲醇0.5mL，將乾物質溶解，混勻。取出上清液經離心後，置小試管中，作為樣液，供高效液相色譜測定用。
（5）高效液相色譜測定
高效液相色譜操作條件：流速1.1mL/min，紙速0.5cm/min，檢定器靈敏度為將10μg/mL標準液20μL調至滿刻度的70%~90%。在做高效液相色譜時，首先用洗脫液平衡分析柱，從進樣口分別進入不同濃度的標準液與樣液各20μL。在米酵菌酸標準峰面積的直線範圍內，將樣液與標準的峰面積相比，以求出樣品中米酵菌酸的含量。米酵菌酸的保留時間為17min。
（6）計算公式
……（2）
式中：C――米酵菌酸標準溶液的濃度，ug/mL；
A――樣液的峰面積；
S――米酵菌酸標準溶液的峰面積；
V――加入甲醇溶解的體積，mL；
D――樣液的總稀釋倍數,屏風；
M――甲醇溶解時相當樣品的重量，g。
（7）確證：如陽性樣品還需用薄層色譜法中樣液與標準點重疊的方法確證。
