解釋
(可重吸收的牙質培養
基) 產品
失活的牙質片層用作骨重吸收培養基.這些片層以5 mm直徑的牙質薄片形式提供(正常厚度
為0.3 mm).每批培養基均經過檢測以確保被有
功能的破骨細胞重吸收.另可提供預重吸收的樣
品片層以便於體外重吸收功能鑑定.
簡介
牙質片層以50片一包形式供應,包裝於已消毒的旋轉蓋封容器內.該片層通過紫外線殺菌並
且只能在無菌環境(如層流櫃)中打開.
儲存
該產品可在室溫下儲存.如果容器不打開且片層保持乾燥,在保質期內不會出現變質.
套用
該產品被設計利用"骨切片檢測"以實現體外骨重吸收量化(1,2),在"骨切片檢測"中,培養的破
骨細胞在礦化的底層挖掘出真正的骨重吸收間
隙.從該檢測的第一個表述開始,在過去的16年
間(1,2),該檢測已被廣泛地套用於研究許多因素
對骨重吸收的影響且是當今體外骨重吸收研究使
用最廣泛的方法(3-8).
骨切片檢測能與從實驗動物(包括小鼠,大
鼠,雞,兔和貓)的骨分離的破骨細胞同時使用.
它已被廣泛用於研究通過直接分離於骨或培養自
骨髓培養基的人破骨細胞重吸收 (4).
該領域當今主要優勢之一是通過RANK配基
的增加從外周紅細胞誘導破骨細胞形成的技術的
發展(9).利用這項技術,大量功能性破骨細胞能
被激活,被激活的功能性破骨細胞將在包括骨位
點重吸收的牙質片層在內的礦化底層挖掘出重吸
收間隙.重吸收很容易被反射光顯微鏡方法而量
化(3,4,6,8).
參考文獻
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Tanaka S and Suda T (1993) New resorption assay with
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Bone Miner. Res. 8:953-960.
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一般使用說明
1. 牙質片層在已消毒的塑膠容器中提供.僅允許在無菌環境(如層流櫃)中打開.
2. 打開容器後,需使用消毒鑷子移開消毒棉塞.
然後片層應通過顛倒試管轉移至已消毒的皮
氏培養皿.
3. 用細鑷子將片層移至培養皿備用,注意不要
刮到牙質表層.該片層被設計可套用在標準
的96孔組織培養盤中,但是它們也能在任何
類型的組織培養容器中使用.
4. 在增加細胞之前,牙質片層應被預加濕至少1
小時.應使用消毒磷酸鹽緩衝液或組織培養
方法.
5. 去除預加濕液後,加入細胞懸濁液.加入的
細胞數量取決於破骨細胞來源和實驗設計.
重吸收由光顯微鏡法進行分析,這樣就有可
能測量單個破骨細胞的活性.然而,在大部
分實驗方案中,加入更多的破骨細胞將更合
適(但是一般要少於200/牙質片).
6. 使用的沉澱時間也取決於破骨細胞來源和實
驗設計.成熟的破骨細胞將在1小時內附在牙
質片層,但是在許多方案中將需要更長的沉
淀時間.培養基能通過使用包括自動移液管
在內的標準組織培養技術和設備而被改變.
7. 由成熟破骨細胞導致的重吸收在培養12小時
後可被檢測出.培養的時間將取決於實驗設
計.
8. 如果使用液態固定液,牙質片層可在組織培
養容器中固定.撤除受限的培養基且用磷酸
鹽緩衝液或組織培養基沖洗組織培養孔兩
次,再加入固定液.常使用的固定液是4%的
戊二醛(用0.2M的甲胂酸鈉溶液配成).
9. 重吸收凹點能在多種標準組織學菌株著色後
鑑定.我們推薦1%的甲苯胺藍(用0.5%四硼
酸鹽溶液配成).牙質片層應在此甲苯胺溶
液中染色3分鐘.多餘的染料通過沖洗去除,
然後在非蒸餾水中漂洗並風乾.已染色的片
層可即在室溫下長期保存.
10. 重吸收陷窩能通過多種途徑鑑定,包括掃描
電鏡和光學顯微鏡.我們推薦使用反射光學
顯微鏡.
11. 使用者應考慮一些推薦的方法以確定最合適
他們需要的技術.
舉例體外產生人破骨細胞的方法
這個方法使用20 mL的外周血細胞將可提供適用
於近50個牙質片層的足夠的破骨細胞.
1. 準備已消毒的牙質片層並置於96孔板的微孔
中.每孔一個牙質片層.加入100 L的最低必
需培養基(MEM) 加10%的小牛胎血清(FCS)
到每個預濕的牙質片層孔中.
2. 混合20 mL的肝素抗凝的外周血和20 mL的
MEM .準備有5個5 ml Histopaque9(∑)的
Falcon試管並加入8 ml的外周血細胞懸浮液.
在450 g下離心30分鐘並輕輕倒出淡黃色表面
層.
3. 在10 mL的MEM 清洗淡黃色表面層並在
1500 rpm離心20分鐘.重懸浮的細胞小球在4
mL的MEM 加10% FCS並使用血球儀計算細
胞數量(注意:細胞的濃度將取決於淡黃色表
面層的效率).
4. 一旦細胞計算出數量加入大約20 l的約
500,000細胞介質到96孔板的每個微孔中.放
入孵育器並離開1小時.
5. 在孵育期後每孔用抽出的介質清洗3次並加入
新鮮的介質.最後用100 l的新製成的MEM
加10% FCS代替,加入RANK ligand (30 ng/mL)
和M-CSF (25 ng/mL).
6. 每2至3天更換介質溶液.破骨細胞將在2周后
形成並且這個過程可以用牙質片層的消減和
染色進行監測.
7. 在最開始培養的2個星期,潛在催化劑的作用
或骨染色體異常轉化抑制劑可加入到培養介
質中.
8. 在培養的第三個星期在牙質片層上出現廣泛
的重吸收,在這個時期可以用於評估潛在抑制
或催化骨重吸收物質的效果.
9. 牙質片層用甲苯胺藍染色和用反射顯微鏡分
析重吸收的程度.
其它骨位點產品
用於免疫診斷
PTHrP N-Terminal, PTHrP (1-34)Rabbit Anti-Human Polyclonal Antibody - Code
RZ-AE-0402
PTHrP Mid-molecule, PTHrP (43-52)
Rabbit Anti-Human Polyclonal Antibody - Code
RZ-AE-0102
PTHrP Far C-Terminal, PTHrP (144-152)
Rabbit Anti-Human Polyclonal Antibody - Code
RZ-AE-0302(兔抗人多克隆抗體)
Osteoclast Antigen (破骨細胞抗原)
Mouse Anti-Human Monoclonal Antibody - Code
RZ- AE-4002(小鼠抗人單克隆抗體)
osteoarthritis Matrix Antigen (骨關節炎矩陣抗原)
Mouse Anti-Human Monoclonal Antibody - Code
RZ-AE-6002
