硫酸甲酯吩嗪(PMS)反應法
琥珀酸脫氫酶能通過一系列人工電子受體,如與PMS(吩嗪二甲酯硫酸鹽),DCPIP(2,6-二氯酚靛酚)等發生反應催化琥珀酸的氧化,而藉助這些中間產物的顏色變化,通過分光光度計檢測即可加以定量反映,其反應式為:①Succinate+PMS→Fumarate+PMSH2;②PMSH2+DCPIP→PMS+DCPIPH2。DCPIP呈藍色,標準的吸收光譜在600nm處,這種色澤可因其還原而漸次變淡,從而600nm處的光密度的變化與DCPIP含量成正比,測定2.6-DPIP的還原速度可以推算出SDH的活力。一分子DCPIP被還原,即代表一分子琥珀酸被氧化。故可測定此反應系統在600nm處的吸收光度變化,來計算SDH的活性。SDH活性計算:(標準-測定)/標準=μmol/min/mg。
鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]還原法
以鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]和琥珀酸鈉為底物,使琥珀酸脫氫酶催化反應將鐵氰化鉀還原為亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6],K4Fe(CN)6再與Fe3+作用生成普魯士藍,在700nm波長測定吸光值,以檢測普魯士藍之生成量,作為琥珀酸脫氫酶的還原力,吸光值愈高表示琥珀酸脫氫酶活力愈強。
TTC(氯化三苯四氮唑)法
無色TTC(2,3,5-氯化三苯基四唑)作為人造受氫體,它在細胞呼吸過程中接受氫,還原成三苯基甲膳(TF)。後者以紅色晶體的形式存在於細胞內,採用有機溶劑(如甲苯、乙酸乙醋、三氯甲烷、丙酮或乙醇等)進行萃取。萃取液測定485nm吸光度後,以TTC還原量表示脫氫酶活性,根據標準曲線計算TF生成量,進而求出TTC-脫氫酶活性。
MTT法
MTT是一種黃顏色的染料。活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT,同時在細胞色素C的作用下生成藍色(或藍紫色)不溶於水的甲臢(Formazana),經異丙醇作用顆粒溶解顯色。在通常情況下,甲臢生成量與活細胞數成正比,因此可根據光密度570nm處OD值推測出活細胞的數目。
NBT(氯化硝基四氮唑藍)法
NBT易溶於水,呈淡黃色,以NBT為受氫體,接受由琥珀酸鈉鹽被酶作用而脫下的氫,進而形成紫藍色的沉澱,於反應體系中加入PMS,混勻,37℃保溫30min,之後加入TCA終止反應。加異丙醇溶解顯色,混勻,即可於548nm測OD值。規定:30min內548nm下OD值為1.0時的酶量為1個活力單位。比活力=活力單位數/毫克蛋白。
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細胞化學
細胞色素氧化酶。 示意圖 脫氫酶能從底物中將電子轉移到氧化試劑上或電子體...染料顯示何種脫氫酶,則由所用底物而定,如用琥珀酸鈉,甲是琥珀酸脫氫酶作用...了他的蛋白質反應,但是1853年R.霍夫曼指出,這個反應實際上是一個測定...
研究簡史 研究方法 研究方法 展望 參考資料 -
核內非組蛋白蛋白質
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簡介 相關資料 參考資料 -
鄒承魯
色素c純化後與線粒體結合時在性質上發生變化,證明細胞色素b與琥珀酸脫氫酶...舉行婚禮。 1951年回國,鄒承魯與王應睞及汪靜英合作純化了琥珀酸脫氫酶...琥珀酸脫氫酶,鄒承魯證明了它們是完全不同的兩個物質。回國後與王應睞等合作純...
人物生平 主要貢獻 獲獎記錄 社會任職 人物評價 -
上海生物生化研究所
化學合成試劑的研製 1993年 上海市科技進步獎 三等獎 1 牛生長激素... 1993年 國家科技進步獎 一等獎 2 高溫DNA順序測定系統的創立...脫氫酶的性質與重組合 1992年 中國科學院自然科學獎 二等 ...
概述 機構設定 學科分類與側重領域 願景 -
生物化學實驗[黃建華、袁道強、陳世峰主編書籍]
琥珀酸脫氫酶的活性測定及丙二酸的抑制作用191實驗六十四辣根過氧化物酶...含量138實驗三十三Folin酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質139...實驗87實驗一還原糖和總糖的測定(3,5二硝基水楊酸法)87實驗二...
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丙二醛
控制率(RCR)、磷氧比(P/O),測定呼吸鏈複合物及α-酮戊二酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶活性.結果:線粒體經MDA作用後,以蘋果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,線粒體兩條呼吸途徑對MDA呈現不同的耐受力,前者...
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生物化學與分子生物學實驗教程
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內容簡介 圖書目錄 -
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實驗三 尿糖的定性測定(班氏試劑法)實驗四 飢餓與飽食對肝糖原含量的影響...實驗及附錄(常用試劑的配製和臨床生化正常值)。第二部分為醫用化學實驗,包括醫用化學實驗基本知識、基本實驗及附錄(常用試劑的配製、常用酸鹼溶液...
內容簡介 目錄 試讀章節 -
現代細胞化學技術及其在中西醫藥中的套用
、過氧化酶顯示法十、單胺氧化酶顯示法十一、琥珀酸脫氫酶顯示法十二、乳酸...對2KIC-RHR心肌糖原含量及琥珀酸脫氫酶活性的影響第九節 潛熄寧對2KIC-RHR...十五、琥珀酸脫氫酶第五節 酶電鏡細胞化學的注意事項第六節 緩衝溶液的配製...
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