基本信息
做殺菌率檢測,首先要備齊以下物品
1.儀器設備
1.1無菌室或超淨工作檯
1.2壓力滅菌鍋
1.3低溫培養箱
1.4試管20×20mm(做鹽水管用)
2.試劑和溶液
2.1氯化鈉(GB1266)
2.2牛肉膏(生物試劑)
2.3蛋白腖(生物試劑)
2.4瓊脂(市售)
2.5生理鹽水(市售)
2.6氫氧化鈉(GB629)
然後就跟著步驟一步一步來吧
測定步驟
3.1培養基的製備稱取5.0g氯化鈉,3.0g牛肉膏,10.0g蛋白腖,15.0g瓊脂置於燒杯中,加入1000ml水,加熱溶解後用氫氧化鈉溶液調PH值至7.2~7.4,趁熱用6~8層紗布過濾,然後分裝於四個250ml錐形瓶中,放入壓力滅菌鍋內,在0.1~0.14Mpa蒸汽壓力下滅菌30min。
3.2玻璃儀器滅菌將實驗用的培養皿、鹽水管、移液管、錐形瓶及量筒等均用紙包好,在0.1~0.14Mpa蒸汽壓力下滅菌30min,取出後放入烘箱烤乾備用。
3.3試樣的製備以工業現場循環水水樣為試樣,要求是未加殺菌劑的循環水。取1000ml循環水水樣,加入100ppmTM-809充分搖勻,備用。
3.4菌種的製備
取未加殺菌劑的循環水水樣,接入到5~10ml不含瓊脂已滅過菌的液體培養基內,在28~32℃培養48~72h,再放入冰櫃(4℃)內,作為菌種保存備用。在試驗的前一天需要再接種培養24h,作為配製菌懸液用。
3.5測定(平板計數法)測定的整個過程都需要在無菌室或超淨工作檯內進行。
3.5.1懸菌液的配製首先取預先放置兩天的自來水300ml~500ml於1000ml的圓底燒瓶內,再吸取上述培養24h的菌懸液0.3~0.5ml加到圓底燒瓶內,搖勻後放入30℃的培養箱內30min。
3.5.2先將被測試樣在分析天平上準確稱取一定的毫克數,用蒸餾水稀釋成1~5ml,然後各取99ml菌懸液分裝於三個250ml錐形瓶內,其中兩個各加入1ml被測試樣,一個做空白,搖勻後放入28~30℃的培養箱內,放置4h,等接種稀釋用。
3.5.3取上述培養4h的空白對照樣1ml,加到9ml無菌生理鹽水中,按十進位稀釋梯度逐級稀釋(如從10-1~10-4),直至需要的稀釋度為止。分別取最後兩個稀釋梯度的稀釋液1ml分別接到無菌培養皿內,每個稀釋度做三個平行皿,被測試樣的操作相同,最後兩個稀釋度可以比空白樣少1~2次方。
3.5.4將滅菌後的培養基冷至45~50℃倒入培養皿內,每皿應灌15~20ml,搖勻,冷卻凝固後倒置於28~30℃培養箱內培養48~72h。
3.6分析結果的表述:
3.6.1用平板統計法得出每毫升樣中的總菌數
3.6.2各選擇一組每皿菌落數在30~300個範圍內進行計數,計算出三個皿的平均菌落數再乘以稀釋倍數。
以百分數表述的殺菌率X按下式計算:
X=(A-B)/A×100式中:A-空白對照樣的菌落數乘以稀釋倍數;
B-被測試樣存活菌落數乘以稀釋倍數;