李斯特氏菌屬

李斯特氏菌屬

李斯特氏菌屬有7個菌種,即單核細胞增生李斯特氏菌,綿羊李斯特氏菌,英諾克李斯特氏菌,威爾斯李斯特氏菌 ,西爾李斯特氏菌 ,格氏李斯特氏菌 ,莫氏李斯特氏菌

基本信息

該菌屬主要引起食物中毒的主要是單核細胞增生李斯特氏菌;1926年由Murray首先發現,可引起兔子單核性白細胞急劇增加,後來發現可以起孕婦流產和腦炎。

(一)生物學特性

單核細胞增生李斯特菌 單核細胞增生李斯特菌

該菌為革蘭氏陽性短桿菌,大小約為0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍彎,兩端鈍圓,常呈V字型排列,偶有球狀、雙球狀,兼性厭氧、無芽胞,一般不形成莢膜,但在營養豐富的環境中可形成莢膜,在陳舊培養中的菌體可呈絲狀及革蘭氏陰性,該菌有4根周毛和1根端毛,但周毛易脫落。

(二)生長條件及培養特性

該菌的生長範圍為2--42℃(也有報導在0℃能緩慢生長),最適培養溫度為35--37℃,在pH中性至弱鹼性(pH9.6)、氧分壓略低、二氧化碳張力略高的條件下該菌生長良好。

李斯特氏菌屬 李斯特氏菌屬

在含2.5g/L瓊脂,80g/L明膠和10g/L葡萄糖的半固體培養基中,37℃培養24h,生長物沿穿刺線以不規則雲霧狀延伸到培養基內,進而擴散到整個培養基,生長達最高量時在培養基表面下3~5mm處形成一絲傘狀的界面。羊肝浸出液瓊脂上的菌落:圓形,光滑,奶油狀,稍扁平,用透過光觀察是透明的。

在血瓊脂上生長良好,四周有狹窄的溶血帶,因血的種類而有變化。

生化反應

該菌觸酶陽性,氧化酶陰性,能發酵多種糖類,產酸不產氣,如發酵葡萄糖、乳糖、水楊素、麥芽糖、鼠李糖、七葉苷、蔗糖(遲發酵)、山梨醇、海藻糖、果糖,不發酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側金盞花醇、棉子糖、衛矛醇和纖維二糖,不利用枸櫞酸鹽,40%膽汁不溶解,吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥氨酸均陰性,VP、甲基紅試驗和精氨酸水解陽性。

(四)血清型

根據菌體(O)抗原和鞭毛(H)抗原,將單增李氏菌分成13個血清型,分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”13 個血清型。致病菌株的血清型一般為1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,後兩型尤多。

(五)抵抗力

該菌對理化因素抵抗力較強,在土壤、糞便、青儲飼料和乾草內能長期存活,對鹼和鹽抵抗力強,60-70℃經5-20min可殺死,70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福馬林20min 可殺死此菌。該菌對青黴素、氨苄青黴素、四環素、磺胺均敏感。

(六)來源與分布及感染途徑

單增李斯特氏菌廣泛存在於自然界中,不易被凍融,能耐受較高的滲透壓,在土壤、地表水、污水、廢水、植物、青儲飼料、爛菜中均有該菌存在,所以動物很容易食入該菌,並通過口腔-糞便的途徑進行傳播。據報導,健康人糞便中單增李氏菌的攜帶率為0.6-16%,有70%的人可短期帶菌,4-8%的水產品、5-10%的奶及其產品、30%以上的肉製品及15%以上的家禽均被該菌污染。人主要通過食入軟乳酪、未充分加熱的雞肉、未再次加熱的熱狗、鮮牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、捲心菜色拉、芹菜、西紅柿、法式餡餅、凍豬舌等而感染,約占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。

該菌可通過眼及破損皮膚、黏膜進入體內而造成感染,孕婦感染後通過胎盤或產道感染胎兒或新生兒,棲居於陰道、子宮頸的該菌也引起感染,性接觸也是本病傳播的可能途徑,且有上升趨勢。

(七)臨床症狀

健康成人個體出現輕微類似流感症狀,新生兒、孕婦、免疫缺陷患者表現為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結膜炎、發熱、抽搐、昏迷、自然流產、腦膜炎、敗血症直至死亡。

(八)控制

單增李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活,熱處理已殺滅了競爭性細菌群,使單增李斯特氏菌在沒有競爭的環境條件下易於存活,所以在食品加工中,中心溫度必須達到70℃持續2分鐘以上。

由於單增李斯特氏菌在4℃下仍然能生長繁殖,所以未加熱的冰櫃食品增加了食物中毒的危險。冰櫃食品需加熱後再食用。

(九)檢測

(1)傳統分離鑑定方法

fraser肉湯 fraser肉湯

增菌培養→生化反應 →動物實驗→協同溶血試驗→血清型分析樣品:

冷凍樣品,2-5℃解凍,不超過18h

若不能及時檢驗,應置於-15 ℃保存。

非冷凍易腐樣品應儘可能及時檢驗。

若不能及時檢驗,應置於4 ℃冰櫃保存,在24h之內檢驗。

增菌方法:

冷增菌法 :將樣品置於胰蛋腖水中4~5℃增菌一個月,再劃線分離

缺點:時間太長,不適於食品衛生的常規檢驗。

快速增菌法 常用選擇性增菌法,分步增菌,增加病原檢出率

總之,傳統的單核細胞增生李斯特氏菌的檢測方法全過程需4~7D,而且沒有一種培養基可以全面的保持所有食品基質或各種李斯特氏菌血清型

(2)免疫學檢測方法

免疫學檢測方法就是利用抗原抗體反應的顯著特異性,而建立的一種快速檢測食品中病原菌的方法。

目前主要利用ELISA技術

特點:操作簡便,快速,可在同一時間內檢測大量樣品,可將純肉湯培養物中的分離物進行術水平的鑑定,但難以進行菌種間的特異分析。

ELISA法的檢測極限為105~106cfu/mL

(3)核酸檢測方法

該方法以李斯特氏菌屬或種特異核酸序列的互補序列為探針進行李斯特氏菌屬或種水平的鑑定

目前多利用PCR技術

特點:敏感性好,但必須經過選擇性增菌以稀釋可能幹擾檢測反應的某些成分。

探針雜交技術檢測極限為105~106cfu/mL

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