抗生素藥敏紙片的組成
每張紙片直徑6毫米,含有所示抗生素濃度,紙片兩面清晰印有抗生素編碼縮寫和劑量。
細菌藥敏實驗方法
1. 肉湯稀釋法
肉湯稀釋法是最早使用的細菌藥敏性測定方法之一,其又可分為宏量肉湯稀釋法和微量肉湯稀釋法。這兩種方法的基本原理相同,都是利用一定濃度的抗菌藥物與含有待試菌的培養液進行系列稀釋,經適溫培養後,肉眼觀察培養器培養液的濁度,以無細菌生長的試管中所含的最低藥物濃度為最低抑菌濃度(MIC)。然後將所有完全清晰無細菌生長的培養器分別移種於不含抗菌藥物的適於被試菌生長的瓊脂平板上,過夜培養後,無菌落生長的瓊脂平板中的最低藥物濃度即為最低殺菌濃度(MBC),肉湯稀釋法通過測定 MIC值和MBC值來判定受試菌的藥物敏感性。
2. 瓊脂稀釋法
瓊脂稀釋法通過測定最低抑菌濃度(MIC)來判讀結果,該法是將待測菌接種於含不同濃度抗菌藥物的瓊脂平板上,經培養後觀察菌的生長情況,細菌不能生長的最低藥物濃度為最低抑菌濃度MIC。
3. K-B紙片法
K-B紙片法是目前使用最為廣泛的細菌藥敏測定方法之一,此法是將浸有抗菌藥物的紙片貼在塗有細菌的瓊脂平板上,抗菌藥物在瓊脂平板上擴散,其濃度呈梯度遞減,因此在紙片周圍一定距離內的細菌受到抑制,培養後會形成一個抑菌圈,通過測定抑菌圈的直徑即可判定受試菌的藥敏性。通常抑菌圈直徑大小與藥物濃度MIC呈負相關 。
實驗內容:
1)用無菌棉棒兒蘸取菌液(金葡)。
2)將多餘菌液在液面上方管壁內輕輕旋轉擠出,塗布在MH瓊脂平板整個平面三次,每次旋轉60度,最後沿平板內緣塗抹一周,以取得均勻接種。
3)平板加蓋室溫乾燥3分鐘。
4)無菌操作,用鑷子將藥敏紙片貼在塗好菌的平板上,各紙片中心相距至少24mm,紙片距平板內緣應大於15mm。
紙片序號對應的藥品:1. getamycin 2.erythromycin 3.vancomycin 4.penicillin
5)輕壓紙片使之緊貼瓊脂表面。
6)37℃ 18-24小時後測量抑菌圈直徑。
藥物敏感性分級:
1)敏感(S)表示測試菌能被測定藥物常規劑量給藥後在體內達到的血藥濃度所抑制或殺滅。
2)中介度(I)在敏感與耐藥之間建立緩衝帶,以減少因各種實驗條件失控對實驗結果的影響 。
3)耐藥(R)表示測試菌不能被測定藥物常規劑量給藥後在體內達到的血藥濃度所抑制。
4. E-test實驗
E-test實驗是結合了稀釋法和擴散法兩種實驗方法的原理與特點建立的一種新的細菌藥敏測定方法。E-test實驗的關鍵是E-test試紙條的質量。E-test試紙條是一條5mm×50mm、內含有一系列預先製備的、濃度呈連續指數增長的抗生素紙條。將E-test試紙條貼在接種細菌的平板上培養過夜,平板上將會出現橢圓形抑菌圈,抑菌圈的邊緣與試紙條交點的刻度濃度即為最低抑菌濃度。
E-test實驗具有稀釋法和擴散法兩種方法的優點:操作簡便,一個平板可最多同時測定6種抗菌藥物的藥敏性;可直接測定細菌的最低抑菌濃度,結果準確、重複性好。由於E-test試紙條較貴,使得該方法在經費方面受到限制 。
抗生素藥敏試紙的套用
抗生素藥物敏感測試紙片除了被用於一般的科研外,也被廣泛用於臨床試驗。依照國家相關規定,用於臨床的藥敏紙片必須要在國家藥監局進行註冊,只有擁有醫療器械註冊證的藥敏紙片才能被用於臨床研究。該產品通過體外實驗檢測抗生素對細菌的有效性。
通過藥敏試驗可以查出耐藥,減少治療錯誤,便於醫生選擇個體化療方案、節省費用。可以進行耐藥監測,為醫院感染控制部門提供防治依據,為經驗用藥提供可靠依據。利用耐藥監測結果控制抗菌藥物套用,減少耐藥菌株的出現,從而延長新藥使用壽命。還可以為新藥的研究和評估提供有價值的信息。
抗生素藥敏試紙的有效期
未開封的塑膠管必須存放在-20℃-8℃,保質期3年。日常使用保存在2-8℃。長期保存於-20℃。打開前需使紙片達到室溫。