內容簡介
有位前輩曾說過:一名合格的實驗技術人員應具備聽、說、讀、寫、思五項能力。聽,聽他人的實驗思路、實踐經驗,以充實自身的實驗設計;說,多與他人交流,在交流中捕捉靈感,豐滿與糾正實驗過程;讀,博覽全書,閱讀文獻著作,積累素材,優選實驗方案;寫,手要勤,隨時記錄實驗感受與疑惑,尋找解決疑惑的途徑;思,則最為重要,實驗中存在一些不確定性因素,勤于思考,設計嚴謹周密的實驗技術路線,隨時調整實驗流程與操作。
在當今生物學和醫學領域中,由於新技術、新方法的層出不窮、日益更新,以及各個專業間的相互滲透與融合,這就要求實驗技術人員不僅要熟知本專業的實驗技術與方法,同時還應了解與熟悉其他與本專業相關的實驗技術內容。實驗技術的實質是實踐經驗積累與沉澱的過程,多次循環往復,不單單是實驗技術熟練的過程,更是熟能生巧、巧中生新的過程。如Masson三色染色(Masson P,1929)經歷了許多實驗者不斷摸索、改良與最佳化,以及各自對染色的理解與需求,使其在獲得準確的染色結果前提下得到了技術上的提高,這就是一些傳統技術方法一直能沿用至今的緣故。新技術、新方法套用的同時,傳統實驗技術也不應被忽略、放棄。為了能使更多的實驗人員全面地了解形態學石蠟切片技術的相關內容,為了給以形態學改變為依託的研究課題提供實驗原理、實驗操作及注意事項等相應的信息,同時也是為了對過去所積累的實踐經驗進行梳理總結,十位不同院校的編者共同努力完成了本書的編寫。
本書以實用性、穩定性、可操作性為編寫宗旨。實用性是從使用者的角度,依據編者的實踐經驗總結和國內外實驗技術的發展,去選擇與編排實驗技術方法與流程等,通過石蠟切片、蘇木精一伊紅染色、特殊染色以及免疫組織化學和原位雜交技術的介紹,使讀者對石蠟切片技術有一個全面的了解,也為相關形態學技術的學習奠定基礎。穩定性是指所選用的實驗技術結果的穩定性,對於初學者而言,實驗操作及實驗結果呈現的可重複性尤為重要。而可操作性則是指從初學者的實際出發,對每項實驗技術力求介紹其原理、具體實驗操作及實驗注意事項等,通俗易懂且操作性強,以期起到實驗指南的作用。
目錄
引言
第1章 形態學製片種類
一、非切片製作方法
二、組織切片製作方法
第2章 組織學石蠟切片製作技術
第1節 標本取材
一、實驗動物的處死方法
二、不同組織器官的取材方法
三、取材注意事項
附:大鼠胸、腹腔臟器的取材方法
第2節 標本固定
一、固定的目的和作用
二、固定的方式
三、影響固定作用的因素
四、固定後的標本修整
五、固定後的標本沖洗
六、固定容器
七、常用固定劑的性質及套用
第3節 標本處理過程:脫水、透明、浸蠟、包埋
一、脫水
二、透明
三、浸蠟
四、包埋
第4節 石蠟切片
一、石蠟切片機與切片刀
二、石蠟切片技術
第5節 染色與染料
一、染色與生物染料
二、染色作用的原理
三、染色方法
四、媒染劑和促染劑
五、染色形式
第6節 蘇木精伊紅染色
一、蘇木精
二、伊紅
三、石蠟切片蘇木精伊紅染色
第7節 封固
一、封固的目的
二、封固劑種類
三、封固劑的折光率
四、常規石蠟切片封固方法
第3章 特殊染色技術
第1節 膠原纖維染色
一、形態結構與特點
二、膠原纖維染色
三、磷鉬酸和(或)磷鎢酸在染色中的作用
四、影響結締組織三色染色的因素
附:苦味酸天狼猩紅染色顯示膠原纖維
第2節 彈性纖維染色
一、形態結構與特點
二、彈性纖維染色
第3節網狀纖維染色
一、形態結構與特點
二、網狀纖維銨銀技術的基本步驟與作用
三、常用的銨銀方法
四、網狀纖維銨銀方法的基本要求
第4節 肥大細胞染色
一、形態結構與特點
二、肥大細胞染色
三、異染性
第5節 胰島細胞染色
一、胰島細胞形態特點
二、胰島細胞染色
第6節 糖原染色
一、顯示糖原的高碘酸雪夫(PAS)反應
二、Best卡紅染色顯示肝糖原
第7節 細胞內DNA和RNA染色
一、Feulgen反應顯示DNA
二、甲綠-派若寧染色顯示DNA和RNA
第8節 肌組織染色
一、Heidenhain鐵蘇木精染色
二、Mallory磷鎢酸蘇木精(ptah)染色
第9節 神經元(細胞)尼氏體染色
一、焦油紫染色
二、甲苯胺藍染色
三、硫堇染色
四、Luxol堅牢藍-焦油紫染色
第4章 免疫組織(細胞)化學技術
第1節 免疫組織(細胞)化學相關的基本概念?
一、抗原
二、抗體
第2節 免疫組織(細胞)化學基本類型與原理
一、免疫組織(細胞)化學直接法
二、免疫組織(細胞)化學間接法
三、非標記抗體法
四、抗生物素生物素法
第3節 免疫組織(細胞)化學技術的種類
第4節 免疫組織(細胞)化學技術的基本過程
第5節 免疫組織(細胞)化學石蠟切片的有關基本技術
一、用於免疫組織(細胞)化學的標本取材
二、用於免疫組織(細胞)化學的標本固定
三、用於免疫組織(細胞)化學的標本處理過程:脫水、透明、浸蠟、包埋
四、用於免疫組織(細胞)化學石蠟切片的製作
五、常用的免疫組織(細胞)化學方法
六、免疫組織(細胞)化學染色主要步驟及注意事項
七、血清封閉排除非特異性著色
八、減少或消除內源性生物素
九、抗體
十、顯色
十、檢測系統
十二、免疫組織(細胞)化學復染
十三、孵育盒的作用?
十四、封固劑的使用
十五、免疫組織(細胞)化學結果與非特異染色的控制
十六、常見的免疫組織(細胞)化學問題
第6節 雙重免疫組織(細胞)化學技術
一、雙重免疫標記染色種類
二、常用的雙重免疫標記配伍類型
三、雙重免疫組織(細胞)化學的基本種類
四、常用的雙重免疫組織(細胞)化學染色方法
五、消除雙重免疫組織(細胞)化學染色間抗體系統的
交叉反應
附:常用的酸性溶液洗脫方法與套用
六、雙重免疫組織(細胞)化學注意事項
第5章 原位核酸分子雜交
第1節 原位核酸分子雜交的基礎知識
一、核酸的化學組成
二、DNA和RNA
三、DNA變性與復性
第2節原位分子雜交的基本原理
一、基本原理
二、探針類型與製備
三、探針標記物與探針標記方法
第3節 原位核酸分子雜交技術的基本步驟與原理
一、雜交前準備
二、雜交預處理
三、雜交反應
四、雜交後處理
五、雜交體的檢測
第4節 對照實驗和實驗中的問題與對策
一、對照實驗
二、實驗中的問題與對策
第6章 形態學技術實驗指導
第7章 附錄