簡介
凝血素,又稱血球凝集素,是一種以高親和性將聚糖結合在糖蛋白、糖脂或多糖上的糖蛋白,凝血素包含有甘露糖和葡糖氨,主要的凝血素含有4.5%甘露糖和葡糖氨,凝血素所含胺基酸基本相同,其不同部分主要是碳水化合物。已經確認,它是一種抗營養因子,主要存在於植物的籽實中,但葉、根、莖中也含有,在籽實中凝血素常分布於絨毛的葉細胞和胚組織中,許多豆科植物的種子中都含有性質各不相同的凝血素,且不同的凝血素可對動物細胞產生各種各樣的作用,其主要原因是凝血素的來源和糖專一性以及供血動物的不同。
大豆凝血素是一種糖原蛋白質,脫脂後的大豆粕粉約含有3%的凝血素,分子量為120,000,由4個相同的亞基組成,每個亞基分子量為30,000,每個分子有4條鏈,每個亞基載有一條缺糖鏈Mang(GIC-NAC)2。大豆凝血素使動物血液中的紅血球凝集,據報導,在白鼠腹內膜上注射凝血素,能把白鼠殺死,Tollefssn,C.F.and Kornfeld R (1983)報導從大豆中提取的凝血素能夠使人的紅細胞發生強烈凝集作用並且能夠產生沉澱,普遍認為凝血素血凝作用的機理為:凝血素分子的一個亞基與一個血紅細胞表面的凝血素專一識別的糖基結合,另一個亞基與另一個細胞的糖基結合,從而通過凝血素的架橋作用導致血球凝聚,具有血型專一性的凝血素與該凝血素的糖結合部位識別血紅細胞表面血型抗原決定簇並與之結合的結果。生長旺盛的細胞易被凝集。除凝血外,大豆中的凝血素還對腸壁、刷狀酶緣活性、小腸黏膜細胞代謝、腸道細菌生態物質代謝及免疫機能產生一定的影響。因此,在利用大豆作為飼料或製取大豆製品時,最好除去大豆中的凝血素。
測定方法
(l)樣品處理:
準確稱取過60目篩孔自然風乾的大豆粉樣1g,放入50ml燒杯中,加入10ml 0.85%NaCI溶液。用玻璃棒攪勻,放電冰櫃4℃條件下浸泡48一72h(視含量多少而定時),每日攪2一3次,使充分溶出,然後將浸泡過的大豆粉樣在4℃低溫高速離心機10000r/min離心20min,最後將上清液傾出,再加入0.85%NaCI溶液5ml於沉澱中,用玻璃棒攪勻,同上離心20min,合併前後兩次上清液搖勻,用小瓶分裝後-10℃下存放備用,最好立即測定。
(2)血液處理:
抽取健康的兔耳血sml,放入內有數粒玻璃球的150ml三角瓶中,邊放邊搖,直至血溫降至室溫,並觀察血液中的纖維蛋白阮粘附到玻璃球上變為纖維蛋白(同時還要觀察紅血球的正常狀態)。之後取三角瓶中兔紅細胞,用0.85%Naa溶液(血球的2一3倍量)洗3次,離心3次。傾去上清液,取兔紅細胞沉澱lml氣分散在loomlo·85寫NaCI溶液中搖勻,放4℃冰櫃中保存,以備作PHA效價用,可存放一周,若混濁需重新製備。同時,取兔血每毫升加3滴0.44寫檸檬酸鈉(破壞血液中纖維蛋白阮)。再迅速加10ml0.85%NaCI溶液稀釋。塗片鏡檢血球,血球形態要求正常,濃度適宜。
(3)凝血反應(2倍稀釋法):
將大豆浸提液在白磁比色板的小孔中,用0.85%NaCI溶液稀釋成一系列不同濃度,(同時用0.85NaCI溶液做空白對照)。然後在每孔中加入處理好的等體積兔血,於37℃保溫箱中反應2h,或放在室溫6~sh條件下,觀察凝血反應現象。
(4)PHA效價測定方法
